| A | B | C | D | E | F | G | H | I | J | K | L | M | N | O | P | Q | R | S | T | U | V | W | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
1 | NADH ε340 = | 6220 | M-1cm-1 | ||||||||||||||||||||
2 | |||||||||||||||||||||||
3 | NADH | Buffer = 50mM phosphates, pH 7 | |||||||||||||||||||||
4 | Molar Mass (g/mol) | 741.6 | |||||||||||||||||||||
5 | single component stock conc. (mM) | 40 | polystyrine plate info: | Falcon brand product # 35 1172 | |||||||||||||||||||
6 | solubility | 50 mg/mL in water, more if basic | "microtest Flat Bottom" polystyrene individually package. Not tissue culture treated plate, 96 well. | ||||||||||||||||||||
7 | uL required | 11,512.00 | Order of operations: | ||||||||||||||||||||
8 | surplus factor | 2 | 1) Make buffer, read with pH probe. Says 7.06. | ||||||||||||||||||||
9 | uL to shoot for | 23024 | 2) Weigh 8.22 mg NADH & dissolve in 277.1 uL buffer. NADH bottle is from 2011. | ||||||||||||||||||||
10 | mg to shoot for | 682.984 | 3) Add required uL of NADH solution to each polystyrine well | ||||||||||||||||||||
11 | mg actually weighed out | 8.220 | 4) Add required uL of buffer to each polystyrine well | ||||||||||||||||||||
12 | uL buffer to add | 277.10 | 5) Read polystyrine plate for 10 min | ||||||||||||||||||||
13 | check: M of solution | 0.04 | 6) move solution to quartz plate and measure 10 min | ||||||||||||||||||||
14 | 7) set up for a mult-hour run in the crystal plate. Unfortunately the software crashed and the data was not available. In the morning, A340 was equal in all wells, indicating all of the NADH had degraded. | ||||||||||||||||||||||
15 | |||||||||||||||||||||||
16 | |||||||||||||||||||||||
17 | row | col | uL NADH | uL buffer | total uL | true_mM_NADH | path_cm | theoretical_OD_from_known_mM | |||||||||||||||
18 | A | 9 | 0 | 150 | 150 | 0.00 | 0.3825 | 0.00 | |||||||||||||||
19 | A | 10 | 0 | 150 | 150 | 0.00 | 0.3825 | 0.00 | |||||||||||||||
20 | A | 11 | 1 | 149 | 150 | 0.27 | 0.3825 | 0.63 | |||||||||||||||
21 | A | 12 | 1 | 149 | 150 | 0.27 | 0.3825 | 0.63 | |||||||||||||||
22 | B | 9 | 2 | 148 | 150 | 0.53 | 0.3825 | 1.27 | |||||||||||||||
23 | B | 10 | 2 | 148 | 150 | 0.53 | 0.3825 | 1.27 | |||||||||||||||
24 | B | 11 | 3 | 147 | 150 | 0.80 | 0.3825 | 1.90 | |||||||||||||||
25 | B | 12 | 3 | 147 | 150 | 0.80 | 0.3825 | 1.90 | |||||||||||||||
26 | C | 9 | 4 | 146 | 150 | 1.07 | 0.3825 | 2.54 | |||||||||||||||
27 | C | 10 | 4 | 146 | 150 | 1.07 | 0.3825 | 2.54 | |||||||||||||||
28 | C | 11 | 5 | 145 | 150 | 1.33 | 0.3825 | 3.17 | |||||||||||||||
29 | C | 12 | 5 | 145 | 150 | 1.33 | 0.3825 | 3.17 | |||||||||||||||
30 | D | 9 | 6 | 144 | 150 | 1.60 | 0.3825 | 3.81 | |||||||||||||||
31 | D | 10 | 6 | 144 | 150 | 1.60 | 0.3825 | 3.81 | |||||||||||||||
32 | D | 11 | 7 | 143 | 150 | 1.87 | 0.3825 | 4.44 | |||||||||||||||
33 | D | 12 | 7 | 143 | 150 | 1.87 | 0.3825 | 4.44 | |||||||||||||||
34 | E | 9 | 8 | 142 | 150 | 2.13 | 0.3825 | 5.08 | |||||||||||||||
35 | E | 10 | 8 | 142 | 150 | 2.13 | 0.3825 | 5.08 | |||||||||||||||
36 | E | 11 | 10 | 140 | 150 | 2.67 | 0.3825 | 6.34 | |||||||||||||||
37 | E | 12 | 10 | 140 | 150 | 2.67 | 0.3825 | 6.34 | |||||||||||||||
38 | F | 9 | 12 | 138 | 150 | 3.20 | 0.3825 | 7.61 | |||||||||||||||
39 | F | 10 | 12 | 138 | 150 | 3.20 | 0.3825 | 7.61 | |||||||||||||||
40 | F | 11 | 16 | 134 | 150 | 4.27 | 0.3825 | 10.15 | |||||||||||||||
41 | F | 12 | 16 | 134 | 150 | 4.27 | 0.3825 | 10.15 | |||||||||||||||
42 | G | 9 | 20 | 130 | 150 | 5.33 | 0.3825 | 12.69 | |||||||||||||||
43 | G | 10 | 20 | 130 | 150 | 5.33 | 0.3825 | 12.69 | |||||||||||||||
44 | |||||||||||||||||||||||
45 | |||||||||||||||||||||||
46 | RESULTS: | ||||||||||||||||||||||
47 | uL.NADH | uL.buffer | total.uL | true_mM_NADH | path_cm | theoretical_OD_from_known_mM | plate.material | mean.OD340 | |||||||||||||||
48 | 1 | 0 | 150 | 150 | 0 | 0.3825 | 0 | polystyrene | 0.174192105 | ||||||||||||||
49 | 2 | 1 | 149 | 150 | 0.27 | 0.3825 | 0.63 | polystyrene | 0.737472368 | ||||||||||||||
50 | 3 | 2 | 148 | 150 | 0.53 | 0.3825 | 1.27 | polystyrene | 1.252155263 | ||||||||||||||
51 | 4 | 3 | 147 | 150 | 0.8 | 0.3825 | 1.9 | polystyrene | 1.748663158 | ||||||||||||||
52 | 5 | 4 | 146 | 150 | 1.07 | 0.3825 | 2.54 | polystyrene | 2.308542105 | ||||||||||||||
53 | 6 | 5 | 145 | 150 | 1.33 | 0.3825 | 3.17 | polystyrene | 2.644335526 | ||||||||||||||
54 | 7 | 6 | 144 | 150 | 1.6 | 0.3825 | 3.81 | polystyrene | 2.932455263 | ||||||||||||||
55 | 8 | 7 | 143 | 150 | 1.87 | 0.3825 | 4.44 | polystyrene | 3.083059211 | ||||||||||||||
56 | 9 | 8 | 142 | 150 | 2.13 | 0.3825 | 5.08 | polystyrene | 3.194856579 | ||||||||||||||
57 | 10 | 10 | 140 | 150 | 2.67 | 0.3825 | 6.34 | polystyrene | 3.321723684 | ||||||||||||||
58 | 11 | 12 | 138 | 150 | 3.2 | 0.3825 | 7.61 | polystyrene | 3.432786842 | ||||||||||||||
59 | 12 | 16 | 134 | 150 | 4.27 | 0.3825 | 10.15 | polystyrene | 3.632619737 | ||||||||||||||
60 | 13 | 20 | 130 | 150 | 5.33 | 0.3825 | 12.69 | polystyrene | 3.647551316 | ||||||||||||||
61 | 14 | 0 | 150 | 150 | 0 | 0.3825 | 0 | quartz | 0.030160526 | ||||||||||||||
62 | 15 | 1 | 149 | 150 | 0.27 | 0.3825 | 0.63 | quartz | 0.482206579 | ||||||||||||||
63 | 16 | 2 | 148 | 150 | 0.53 | 0.3825 | 1.27 | quartz | 0.910155263 | ||||||||||||||
64 | 17 | 3 | 147 | 150 | 0.8 | 0.3825 | 1.9 | quartz | 1.301217105 | ||||||||||||||
65 | 18 | 4 | 146 | 150 | 1.07 | 0.3825 | 2.54 | quartz | 1.790414474 | ||||||||||||||
66 | 19 | 5 | 145 | 150 | 1.33 | 0.3825 | 3.17 | quartz | 2.123255263 | ||||||||||||||
67 | 20 | 6 | 144 | 150 | 1.6 | 0.3825 | 3.81 | quartz | 2.446368421 | ||||||||||||||
68 | 21 | 7 | 143 | 150 | 1.87 | 0.3825 | 4.44 | quartz | 2.699015789 | ||||||||||||||
69 | 22 | 8 | 142 | 150 | 2.13 | 0.3825 | 5.08 | quartz | 2.860985526 | ||||||||||||||
70 | 23 | 10 | 140 | 150 | 2.67 | 0.3825 | 6.34 | quartz | 3.078928947 | ||||||||||||||
71 | 24 | 12 | 138 | 150 | 3.2 | 0.3825 | 7.61 | quartz | 3.277535526 | ||||||||||||||
72 | 25 | 16 | 134 | 150 | 4.27 | 0.3825 | 10.15 | quartz | 3.531682895 | ||||||||||||||
73 | 26 | 20 | 130 | 150 | 5.33 | 0.3825 | 12.69 | quartz | 3.643409211 | ||||||||||||||
74 | |||||||||||||||||||||||
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