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1 | 2015_03_31 Probe autoinduction conditions for ACS purification - vary time at RT, percent glycerol | |||||||||||||||||||||||||||
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3 | tube | tube mL | mL medium | mL glycerol | strain | uL glycerol | mL air | percent glycerol added | percent glycerol | inoculation time | ||||||||||||||||||
4 | 1 | 50 | 2 | BL21(DE3) pET ACS L641P | 48 | 0.58 | 3/31/2015 15:25:00 | |||||||||||||||||||||
5 | 2 | 50 | 10 | BL21(DE3) pET ACS L641P | 40 | 0.58 | 3/31/2015 15:25:00 | |||||||||||||||||||||
6 | 3 | 50 | 25 | BL21(DE3) pET ACS L641P | 25 | 0.58 | 3/31/2015 15:25:00 | |||||||||||||||||||||
7 | 4 | 50 | 40 | BL21(DE3) pET ACS L641P | 10 | 0.58 | 3/31/2015 15:25:00 | 60 | percent glycerol stock | |||||||||||||||||||
8 | 5 | 50 | 10 | 0 | BL21(DE3) pET ACS L641P | 0 | 40 | 0 | 0.58 | 3/31/2015 15:25:00 | 11/14? pg 534 | glycerol stock prep date | ||||||||||||||||
9 | 6 | 50 | 10 | 0.05 | BL21(DE3) pET ACS L641P | 50 | 40 | 0.30 | 0.88 | 3/31/2015 15:25:00 | autoclave | prep method | ||||||||||||||||
10 | 7 | 50 | 10 | 0.1 | BL21(DE3) pET ACS L641P | 100 | 40 | 0.59 | 1.17 | 3/31/2015 15:25:00 | ||||||||||||||||||
11 | 8 | 50 | 10 | 0.2 | BL21(DE3) pET ACS L641P | 200 | 40 | 1.18 | 1.75 | 3/31/2015 15:25:00 | ||||||||||||||||||
12 | 9 | 50 | 10 | 0.5 | BL21(DE3) pET ACS L641P | 500 | 40 | 2.86 | 3.43 | 3/31/2015 15:25:00 | ||||||||||||||||||
13 | 10 | 50 | 10 | 1 | BL21(DE3) pET ACS L641P | 1000 | 40 | 5.45 | 6.03 | 3/31/2015 15:25:00 | ||||||||||||||||||
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17 | Note: The recipe I have been using has no magnesium. Helen is going to make a stock then test whether adding it helps. | |||||||||||||||||||||||||||
18 | Make a master stock of inoculum. | |||||||||||||||||||||||||||
19 | 137 | mL required | ||||||||||||||||||||||||||
20 | 1.15 | excess factor | Inoculum = ACS L641P restreaked from -80oC on 2/23 (~5 weeks ago!) and grown overnight at RT in LB + 2uL/mL Km | |||||||||||||||||||||||||
21 | 158 | mL to prepare | ||||||||||||||||||||||||||
22 | 0.01 | overnight ratio | ||||||||||||||||||||||||||
23 | 1.58 | mL overnight | NanoDrop OD at inoculation: | |||||||||||||||||||||||||
24 | 159 | final mL | ||||||||||||||||||||||||||
25 | 318 | uL Km | ||||||||||||||||||||||||||
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