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1 | 5x Isothermal Reaction Mix | ||||||||||||||||||||||||||
2 | Reagent | Concentration | Unit | Volume stock / mass (ul) | |||||||||||||||||||||||
3 | Tris-HCL | 500 | mM | 1000 | |||||||||||||||||||||||
4 | MgCl2 | 50 | mM | 50 | |||||||||||||||||||||||
5 | PEG-8000 | 25 | % | 625 | g | ||||||||||||||||||||||
6 | NAD | 5 | mM | 200 | Total desired volume (ml) | ||||||||||||||||||||||
7 | DTT | 50 | mM | 1 | |||||||||||||||||||||||
8 | dNTPs | 1 | mM | 20 | 2 | ||||||||||||||||||||||
9 | PCR grade H20 | NA | NA | 104 | |||||||||||||||||||||||
10 | Grand total (ml) | 2 | |||||||||||||||||||||||||
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12 | 1.33x Gibson assembly master mix | ||||||||||||||||||||||||||
13 | Reagent | Concentration | Unit | Volume stock (ul) | |||||||||||||||||||||||
14 | Taq ligase | 5.3 | units/ul | 10.6 | |||||||||||||||||||||||
15 | 5x isothermal buffer | 1 | X | 16 | Total desired volume (ul) | ||||||||||||||||||||||
16 | DNA polymerase | 0.03 | units/ul | 0.48 | 80 | ||||||||||||||||||||||
17 | T5 exonuclease | 0.005 | units/ul | 0.4 | Total Desired volume (ml) | ||||||||||||||||||||||
18 | PCR grade H20 | NA | NA | 52.52 | 0.08 | ||||||||||||||||||||||
19 | Grand Total | 80 | |||||||||||||||||||||||||
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24 | Recipes taken from | ||||||||||||||||||||||||||
25 | https://openwetware.org/wiki/Gibson_Assembly | ||||||||||||||||||||||||||
26 | https://www.protocols.io/view/homemade-gibson-mastermix-n9xdh7n?step=1 | ||||||||||||||||||||||||||
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