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CLARUS Histoplasma Galactomannan EIA (HGM201) – Procedimiento resumido
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EtapaProcedimiento
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1. PreparaciónLlevar reactivos y muestras de orina a 20–25 °C. Preparar buffer de lavado 1X: 1 parte de concentrado 20X + 19 partes de agua destilada/desionizada.
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2. EstándaresCurva estándar: preparar 25; 12,5; 6,25; 3,1; 1,6; 0,8 y 0,4 ng/mL por dilución seriada. Punto de corte: preparar calibrador 12,5 ng/mL. Vortex y punta nueva en cada dilución.
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3. SiembraDispensar 100 µL/pocillo de: blanco (buffer lavado 1X), control positivo, control negativo, estándares/calibrador y muestras. Agitar suavemente 1–5 s.
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4. Incubación 1Incubar 60 ± 5 min a 37 ± 1 °C.
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5. LavadoAspirar. Lavar con 370 µL × 3 ciclos o 300 µL × 5 ciclos. Al final, secar la placa sobre papel absorbente.
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6. ConjugadoAgregar 100 µL de conjugado por pocillo. Agitar suavemente 1–5 s. Incubar 45 ± 5 min a 37 ± 1 °C.
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7. Segundo lavadoRepetir aspiración y lavado como en el paso 5.
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8. TMBAgregar 100 µL de TMB por pocillo, iniciar cronómetro con el primer pocillo y agitar suavemente. Incubar 30 ± 1 min a 37 ± 1 °C.
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9. StopAgregar 100 µL de solución de interrupción en el mismo orden usado para TMB.
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10. LecturaLeer dentro de los 15 min. Lector dual: 450 nm con referencia 620/630 nm. Usar como blanco el pocillo con buffer de lavado 1X.
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11. InterpretaciónCurva estándar: negativo <0,20 ng/mL; positivo ≥0,20 ng/mL. Punto de corte: negativo <1,0 unidad EIA; positivo ≥1,0 unidad EIA.
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Criterios de validez / control de calidad (resumen)
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Curva estándarR² ≥ 0,990; blanco DO cruda <0,120; control positivo 3,5–7,5 ng/mL; control negativo <0,2 ng/mL.
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Ajuste linealAdemás: intersección Y entre -0,025 y 0,030.
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Punto de corteCalibrador 12,5 ng/mL: DO ajustada 0,500–1,350; control positivo 2,5–7,0 unidades EIA; control negativo <1,0 unidad EIA; blanco <0,120.
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ImportanteLa curva/calibrador y controles deben incluirse en cada corrida. Si los controles no cumplen, los resultados de pacientes son inválidos y debe repetirse el ensayo.
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Nota: hoja resumida para uso interno. Ante discrepancias, prevalece el IFU HGM201 del fabricante.
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