Modul 13

​

BlueGel Elektroforese

Formål med modulet

I skal lære at:

• anvende en BlueGel elektroforese
• aflæse resultater på en BlueGel elektroforese
• konkludere på jeres forsøg

Program

​

• Gruppeinddeling
• Hvor er alle materialer?
• Find øvelsesvejledningen
• Køre BlueGel elektroforese
• Opsamling
• Oprydning

​

​

​

Materialer

Fælles for alle grupper

• BlueGel elektroforesen
• Handsker - VIGTIGT
• Kitler
• Pipettespidser og pipetter svarende til 5-12 µl
• Desinficerende og køkkenrulle
• Affaldsstativer
• 2% agarosegel - en gel for 2 grupper

​

​

Væsker til grupperne

• 5 x loadingbuffer - fordel gerne 25 µl i små PCR rør til hver gruppe

Loadingbuffer gør det muligt for jer at se jeres DNA prøve i hver brønd

• ca. 25 ml 1 x TAE buffer i et bærgerglas til 2 grupper

TAE hjælper med at opløse DNA fragmenter

• 6 µl Markør (100bp) i et PCR rør til 2 grupper
• PCR prøverne fra forrige modul

Forberedelse

Forbered Gelen - to grupper deles om en gel med 9 brønde

1. BRUG HANDSKER.
2. Dæk gelen med 1xTAE buffer - ca. 25 ml

​

…TAE hjælper med at opløse DNA fragmenter

​

Forbered jeres PCR-rør

• Tilsæt 5 µL 5 x loadingbuffer til jeres PCR-rør og bland ved at suge op og ned med pipetten.

​

….Loadingbuffer gør det muligt for jer at se jeres DNA prøve i hver brønd

Teknik

• Hvil albuerne på bordet
• Tag jer god tid
• Placer pipettespids lige over brønden
• Hæld forsigtig væsken i
• Mens I hælder væsken i, skal I langsomt løfte pipettespidsen op

Tilsæt prøverne

Tilsæt prøverne i gelen

Første gruppe tilsætter 5 µl markør (100bp) i første brønd og herefter 12 µl af PCR prøver. Se eksempel nedenfor:

• Brønd 2: positiv kontrol art 1 prøve A
• Brønd 3: negativ kontrol art 1 prøve A
• Brønd 4: eDNA art 1 prøve A
• Brønd 5: eDNA art 1 prøve A

​

Næste gruppe starter fra brønd 6 og tilsætter 12 µl af PCR prøver i brøndene. Se eksempel nedenfor:

• Brønd 6: positiv kontrol art 2 prøve A
• Brønd 7: negativ kontrol art 2 prøve A
• Brønd 8: eDNA art 2 prøve A
• Brønd 9: eDNA art 2 prøve A

​

Brønd 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Start BlueGel elektroforesen

​

Kig på videoen - især til sidst

​

1. Sæt låget på elektroforesekarret og forbind ledningerne med strømforsyningen
2. Der tændes for strømmen til BlueGel elektroforese og det blå lys, hvorved man kan følge DNA-bånd undervejs i elektroforesen. Gelen køres i ca. 15-20 min.

​

​

Fotografer og beskriv gelen

​

​

• Læg det sorte låg på gelen og tag et billede med telefonen
• Beskriv gelen.
• Er der bånd?
• Hvad svarer de forskellige bånd til?

​

• Oprydning

​