Моделирование нейровоспалительного процесса в сетчатке у кроликов
Лисовская О.А, Павленко Т.А., Чеснокова Н.Б., Безнос О.В., Шикарева Н.Н.
ФГБУ «НМИЦ ГБ им. Гельмгольца» Минздрава России
отдел патофизиологии и биохимии
Актуальность
Распространенность нейродегенеративных заболеваний продолжает увеличиваться, что актуализирует проблему их ранней диагностики и лечения.
К числу офтальмопатологий, в основе которых лежат нейродегенеративные процессы, сопровождающиеся нарушением метаболизма дофамина и хроническим нейровоспалением, относятся глаукома, возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия и др.
Факторы, участвующие в патогенезе нейровоспаления: провоспалительные цитокины, нейронспецифические белки и продукты их протеолиза, маркеры окислительного стресса, матриксные металлопротеиназы, в том числе фактор некроза опухоли
Яхно Н.Н., 2011, Угрюмов М.В., 2014, Иллариошкин С.Н. и др. 2015, Нероев В.В., 2011, Нероев В.В., 2018, Ивахненко О.И. и др., 2021, Либман Е.С., Глаукома, 2009, Еричев В.П., , 2012,Газизова И.Р., РМЖ, 2014, Петров С.Ю., 2020 , Ashok A., Singh N., Chaudhary S., et al. 2020, Chen P.J., Wan L., Lai J.N., et al. 2021, Bilbao-Malavé V., González-Zamora J., de la Puente M., et al. 2021, Ивахненко О.И. и др., 2021, Нероев В.В. и др, 2023., Кузьмин Е.А. и др., 2024.
�Роль альбумина и TNF при нейродегенеративном процессе
David C et al, 2018, Sajjad Shojai et al, 2022, Cui Y, et al, 2024
при повышении концентрации участвует в нейровоспалении и нейродегенерации
Альбумин функции
(основной компонент при определении содержания общего белка)
источник
аминокислот
Фактор некроза опухоли
функции
(провоспалительный цитокин)
норма
патология
осморегулятор
переносчик веществ
шаперон
антиоксидант
дифференцировка
пролиферация
выживание клеток
медиатор
врожденного иммунитета
Цель работы
Оценить уровень нейровоспалительных факторов в сетчатке при моделировании нейродегенеративного процесса в глазу путем интравитреального введения дофаминергического нейротоксина.
- опытная группа 1 – (5 кроликов, 10 глаз) 6-OHDA интравитреально в оба глаза по 0,25 мг, опытная группа 2 - по 0,5 мг (5 кроликов, 10 глаз), контрольная группа получала интравитреальные инъекции контрольного раствора без нейротоксина (5 кроликов, 10 глаз);
- оценивали состояние глазного дна (цифрая фундус-камера (Aurora);
-через 2 недели после введения 6-OHDA и контрольного раствора в гомогенате сетчатке проводили определение концентрации общего белка по методу Lowry и TNF-α методом ИФА.
Материалы и методы
Цифровая портативная
фундус-камера, Aurora
Мкропланшетный фотометр
BioTek Synergy
�Исследование состояния глазного дна ��Влияние дофаминергического нейротоксина (6-OHDA) на площадь повреждения сетчатки �в зависимости от его концентрации после интравитреального введения.
Глазное дно кролика до и после введения нейротоксина 0,25 мг
Глазное дно кролика до и после введения нейротоксина 0,5 мг
При более высокой концентрации 6-OHDA формировалась большая площадь повреждения сетчатки
Содержание общего белка и фактора некроза опухоли в сетчатке у кроликов после интравитреального введения 6-OHDA
После введения нейротоксина на 14 сутки обнаружен более высокий уровень общего белка и TNF-α по сравнению с контролем.
Доказано развитие нейровоспаления
Концентрация общего белка
Концентрация TNF-α
Выводы
1. При развитии нейродегенеративного процесса в глазу на фоне интравитреального введения дофаминергического нейротоксина повышается содержание общего белка и провоспалительного цитокина TNF-α в сетчатке, что подтверждает развитие нейровоспаления;
2. Высокий уровень белка указывает на повышение сосудистой проницаемости в сетчатке на фоне нейровоспалительного процесса;
3. Показан дозозависимый эффект влияния нейротоксина на площадь повреждения сетчатки и на концентрацию общего белка в ней;
4. Данная модель может рассматриваться для поиск биомаркеров нейродегенерации, нейровоспаления в сетчатке и тестирования новых лекарственных препаратов.