ВестернБлот экстрактов аллергенов

Каждый экстракт как диагностический маркер состоит из набора компонентов. В силу биологической природы и ассортимент, и количественные характеристики компонентов меняются от партии к партии сырья, из которого делают экстракт. Понятие «точный» экстрактный маркер – не существует. Экстрактные маркеры - «разные»

из за

большого числа компонентов, которые на сегодня не изучены, не описаны, что не исключает их присутствие в составе целостного аллергена, снижается качество диагностики

​

Такие компоненты могут быть выявлены в постановке ВестернБлот экстракта исследуемого аллергена

14 кДа

​

25 кДа

​

ВестернБлоты экстракта амброзии

30 кДа

​

40 кДа

​

50 кДа

​

компьютерная программа CLIQS

�

Пример использования

ВестернБлот экстракта березы t3 , использовавшийся на экстрактном пыльцевом блоте. Инкубирован сывороткой пациента Н. (трек 1) и пациента без сенсибилизации к пыльце березы (трек 2) Шкала молекулярных масс (трек 3)

Bet v 1

Bet v 6

Bet v 1 PR-10, Bet v 1 family member 129 95% 17 кДа�Bet v 2 Profilin 130 22% 15 кДа�Bet v 3    "Polcalcin-like protein (4 EF-hand)"131 10% 24 кДа�Bet v 4 Polcalcin 132 5% 7 кДа�Bet v 6   "Isoflavone reductase-like and  phenylcoumaran benzylic ether reductase"  133 32% 35 кДа�Bet v 7 Cyclophilin 134 21% 18 кДа

Молекулярные массы компонентов экстракта березы t3

Пациент Н. в качестве средства АСИТ использует Oraltek

Description

Native (non-modified) allergenic extracts for specific immunotherapy. Prepared in glycerol for oral (sublingual) administration in spray.

Biological standardisation

Inmunotek standarizes its allergenic extracts in biological units (BU) following the Nordic guidelines. The biological concentration of extracts used in Oraltek is given in Therapeutic Units (TU)/mL. 10,000 TU/mL are equivalent to 10,000 BU/mL.

Oraltek

Что знает врач клиницист об

Biological standardization�Inmunotek standardizes the allergen extracts following the Nordic Countries Norms*, which define that “the activity of an allergen extract has 10,000 Biological Units (BU) when it causes a skin reaction of the same size as that of the positive reference solution consisting of 54.3 mml/L of histamine (histamine dihydrochlorhydrate at 10 mg/mL) when both solutions are administered with the same technique (prick test) in at least 20 subjects who are clinically allergic to the corresponding allergen extract”. Почему 20 , а не 44 или 13, каковы количественные показатели сенсибилизации у добровольцев, К экстракту?

Immunotek manufactures allergen extracts for producing diagnostics and vaccines under Proper Manufacturing Standards and therefore is authorized by Spain’s Medication Agency.

Oraltek

Биологическая стандартизация – определение количества лекарственного препарата по его эффекту при

экспериментальном сопоставлении с эффектом стандарта.

Биологическую стандартизацию используют в том случае, когда действующее начало препарата невозможно или нерационально выделять в чистом виде и, следовательно, производить его прямое количественное измерение. Такая ситуация возможна при использовании препаратов, получаемых из природного сырья. Содержание активных веществ и биологическая эффективность одного и того же количества сырья в разных партиях колеблется, иногда значительно. Для производства препарата со стандартной дозой активность каждой партии сырья приходится испытывать путем сравнения с общепринятым эталоном, закрепленным в Государственной фармакопее. Количество препарата в этом случае измеряется в установленных законом (Государственной фармакопеей) единицах – единицах действия (ЕД или ED), международных единицах (МЕ) и т.д.

In addition, most commercial allergen extracts used in SIT are well standardized for major allergens, but contain only minimal or variable amounts of minor allergens [90,91]. Thus, patients with sensitization to minor allergens alone will likely not receive sufficient amounts of allergen to achieve a successful outcome by SIT. A recent study reported that patients receiving a 2-year course of SIT with either birch or grass pollen had a much more favourable outcome with SIT when sensitization to the marker allergens of birch or grass pollen were detected compared to patients sensitized to only minor, cross-reactive allergens [92].

​

Биологическая стандартизация по своей природе не может характеризовать отдельные компоненты экстракта, будь они мажорами или минорами

A WAO - ARIA - GA2 LEN consensus document on molecular-based allergy diagnostics

14 кДа

25 кДа

30 кДа

50 кДа

Bet v 1

​

​

«балластные» для пациента Н. белки

Электрофорез экстракта Oraltek

17 кДа слабая реакция

30 кДа слабая реакция

60 кДа реакция не выявлена

5

4

3

ВестернБлот экстракта березы и вакцины

Рис. 1. Результаты связывания сывороточных IgE-антител двух пациентов: сенсибилизированных к пыльце березы (2,4) и без сенсибилизации (1,3) с белками водно-солевого экстракта пыльцы березы повислой (А) и АСИТ препарата экстракта пыльцы березы повислой (В) (вестерн блоттинг),

5 – маркер молекулярного веса.

2

1