INGENIERÍA GENÉTICA
CMC TEMA 4
DEL GEN A LA PROTEÍNA
¿Dónde están los genes?.
ADN bicatenario lineal (virus)
ADN monocatenario circular (virus)
ADN bicatenario circular (virus y bacterias).
Cromatina (célula en interfase)
ADN asociado a histonas
Dímero concatenado (mitocondrias)
Niveles de complejidad del ADN
ADN monocatenario lineal (virus)
VIRUS: Una molécula de ADN
PROCARIONTES: Un cromosoma bacteriano y varios plásmidos
EUCARIONTES: núcleo, mitocondrias y cloroplastos
Cromosomas (célula en división)
LOS GENES
El ADN como material hereditario
1952. Hershey y Chase demostraron que en el resto de seres vivos el ADN también es el portador de la información genética, y no las proteínas como se pensaba.
Trabajaron con el virus bacteriófago T2, un virus que ataca a la bacteria Escherichia coli, y que está formado únicamente por una cápsida de proteínas con una molécula de ADN en su interior.
Los aminoácidos de las proteínas del virus están formados por azufre, pero no por fósforo. Los nucleótidos del ADN vírico contienen fósforo, pero no azufre.
Fago T2 (MET)
1944. Avery demostró que el factor transformante era el ADN. El ADN es la molécula portadora del material hereditario en bacterias.
La capacidad transformante de las bacterias virulentas de Stroptococcus pneumoniae desaparecía cuando se añadían a las colonias enzimas que destruían el ADN.
Chase y Hershey
Marcaron radiactivamente un grupo de virus con 32P y otro grupo con 35S. Con cada grupo infectaron un cultivo bacteriano diferente, de los que posteriormente se separaron los restos de los virus de las bacterias mediante
centrifugación.
Se midió la radiactividad tanto en la fracción con los restos de los virus como en el medio intracelular de las bacterias. Se observó que el 35S había quedado en el exterior de las células mientras que el 32P había penetrado en el interior de las
células bacterianas.
El virus inyecta su ADN en la bacteria y no sus proteínas. El ADN se integra en el cromosoma bacteriano y dirige la formación de nuevas cápsidas y copias de su ADN para forma virus hijos.
EL ADN
Adenina
Citosina
Timina
Guanina
Extremo 3’
Extremo 5’
Estructura primaria del ADN
ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL ADN
2 nm
Par de bases nitrogenadas
Armazón fosfoglucídico
3,4 nm
0,34 nm
ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL ADN
5´
5´
3´
3´
Extremo 3’
Extremo 5’
Extremo 3’
Extremo 5’
Estructura secundaria del ADN
Ley de equivalencia de bases de Chargaff
ESTRUCTURA DEL ADN
ESTRUCTURA DEL ADN
ROSALIND FRANKLIN
1920-1958
MAURICE WILKINS
1916-2004
EDWIN CHARGAFF
1905-2002
Duplicación del ADN
DUPLICACIÓN DE LA MOLÉCULA DE ADN
DUPLICACIÓN DE LA MOLÉCULA DE ADN
¿Cómo funcionan los genes?
ADN
ARNm
PROTEÍNA
Replicación
Transcripción
Traducción
ARNr y ARNt
UN GEN, UNA PROTEÍNA
UN GEN, UNA PROTEÍNA
https://www.youtube.com/watch?v=fC_h0zWM1us&index=2&list=PLCF59151A270F7F74
TRANSCRIPCIÓN
BASES NITROGENADAS DEL ADN:
BASES NITROGENADAS DEL ARN:
BASES COMPLEMENTARIAS EN ADN: (A – T ) (G – C )
BASES COMPLEMENTARIAS EN ARN: (A – U ) (G – C )
DEL ADN AL ARN
DEL ARN A LA PROTEÍNA
EL CÓDIGO GENÉTICO
AUG
Iniciación
UGA
UAA
UAG
Terminación
Ej. ¿Qué aminoácido está codificado por el codón GAC?
UNIVERSAL
Cada codón codifica para el mismo aminoácido en todos los organimos, incluidos los virus.
El código ha tenido un solo origen evolutivo.
Existen excepciones en las mitocondrias, algunas bacterias y protozoos.
A excepción de la metionina (Met) y el triptófano (Trp), un aminoácido está codificado por más de un codón (codones sinónimos).
Esto es una ventaja ante las mutaciones ya que no tiene por qué alterarse el amionoácido codificado por el codón mutado.
DEGENERADO
Cada codón sólo codifica a un aminoácido.
SIN IMPERFECCIÓN
Los tripletes se disponen de manera lineal y continua, sin espacios ni comas entre ellos y sin compartir bases nitrogenadas. Su lectura se hace en un único sentido (5’→3’), desde el codón que indica el comienzo de la proteína hasta el que indica su fin.
CARECE DE SOLAPAMIENTO
Posibilidad varias fases de lectura
Met
Gli
Tre
His
Ala
Fen
Ala
Met
Leu
Leu
Pro
2ª fase de lectura
Codones de iniciación
CARACTERÍSTICAS DEL CÓDIGO GENÉTICO
Un mismo ARNm puede tener varios codones de inicio, por lo tanto, varias fases de lectura.
Un mismo ARNm puede tener varios codones de inicio y codificar para varios polipéptidos.
¿Cómo se lleva a cabo la Traducción?
DEL ARN A LA PROTEÍNA
EL PROCESO DE LA TRADUCCIÓN
PARA QUE TENGA LUGAR LA TRADUCCIÓN SE NECESITA:
RIBOSOMAS. Donde se realiza la síntesis proteica.
Los ribosomas son orgánulos citoplasmáticos no membranosos, formados por ARNr y proteínas específicas. Están constituidos por dos subunidades: una mayor y otra menor. Cuando comienza la síntesis de una proteína, ambas subunidades, que están libres en el citoplasma, se asocian.
SUBUNIDAD MENOR
SUBUNIDAD MAYOR
A la subunidad menor se le une el ARNm.
A la subunidad mayor se le unen los aminoácidos.
En un ribosoma existen tres lugares de unión de los ARN de transferencia: sitio E, donde se sitúa el ARNt antes de salir del ribosoma, sitio P (peptidil), donde se sitúa la cadena polipeptídica en formación, y sitio A (aminoacil), donde entran los aminoácidos que se van a incorporar a la cadena polipeptídica en formación.
ARN MENSAJERO, que lleva la información para sintetizar la proteína.
AMINOÁCIDOS, que son los componentes de las proteínas.
ARN DE TRANSFERENCIA, que transportan los aminoácidos al ribosoma y los incorporan en el orden preciso.
ENZIMAS Y ENERGÍA.
E
P
A
E
P
A
ARNt - Met
Codón iniciador (AUG)
ARNm
Subunidad grande
Sitio E
Sitio P
Sitio A
INICIACIÓN
3’
3’
5’
5’
1
ARNm
Aminoacil -ARNt
3’
5’
3’
5’
Enlace peptídico
El aminoácido se libera del ARNt
2
ELONGACIÓN
TRADUCCIÓN
Desplazamiento del ribosoma
5’
3’
3’
5’
E
P
A
ARNm
ARNm
TRADUCCIÓN
3
TERMINACIÓN
5’
3’
ARNt
Extremo amino terminal de la cadena proteica
Codón de terminación (UAA, UGA, UAG)
5’
3’
ARNm
Separación de las dos subunidades del ribosoma
Extremo amino terminal de la cadena proteica
Extremo carboxilo terminal de la cadena proteica
Factor de liberación
Polirribosomas
Microfotografía electrónica (MET, falso color) de un polirribosoma.
Tanto en procariontes como en eucariontes, si el ARN a traducir es lo suficientemente largo, puede ser leído por más de un ribosoma a la vez, formando un polirribosoma o polisoma, lo que permite que la célula sintetice rápidamente muchas copias de un mismo polipéptido.
Ribosoma
ARNm
Proteína en formación
EL GENOMA HUMANO
PROYECTO GENOMA HUMANO
PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS DEL GENOMA HUMANO
EN ABRIL DE 2003 SE COMPLETÓ POR FIN TODA LA SECUENCIA DE NUCLEÓTIDOS DEL GENOMA HUMANO.
Ser Vivo | Tamaño del genoma (Millones de pares de bases) |
Mosca de la fruta | 180 |
Pez globo | 400 |
Serpiente | 2100 |
Hombre | 2850 |
Cebolla | 18000 |
Tritón | 84000 |
Helecho | 160000 |
Ameba | 670000 |
La Epigenética
Los dispositivos epigenéticos son los vestidos bioquímicos que lleva el ADN desnudo. Si estos vestidos son finos y transparentes, entonces permiten ver el ADN y los genes pueden expresarse. Si en cambio, estos vestidos son gruesos, no permiten ver el ADN y no dejan expresar los genes.
La epigénesis estaría definida por cambios reversibles del ADN que hacen que unos genes se expresen o no dependiendo de condiciones exteriores.
Biotecnología
Conjunto de procesos que permiten la utilización de organismos vivos (generalmente microorganismos) para la obtención de productos útiles para el hombre.
La biotecnología tradicional utiliza los microorganismos para obtener por productos comestibles como el pan, el vino, la cerveza (fermentación alcohólica), el yogur, el queso...(fermentación láctica).
La biotecnología moderna permite obtener productos como vacunas y medicamentos mediante técnicas de recombinación de ADN, es decir, uniendo fragmentos de ADN de diferente procedencia.
INGENIERÍA GENÉTICA
Conjunto de técnicas y métodos que permiten manipular el ADN. Los organismos cuyo ADN ha sido manipulado mediante ingeniería genética reciben el nombre de transgénicos. Son técnicas de ingeniería genética las
siguientes:
DE LA BIOTECNOLOGÍA A LA INGENIERÍA GENÉTICA
CAMPOS DE APLICACIÓN DE LA INGENIERÍA GENÉTICA
:
CON EL DESARROLLO DE LA INGENIERÍA GENÉTICA SURGEN NUEVAS DISCIPLINAS
TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
Ingeniería genética
El enzima de restricción reconoce una zona determinada dentro del
ADN
Corta entre determinados nucleótidos
TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
Paso 1. La enzima de restricción corta por el sitio de restricción.
Paso 2. Se añade el ADN exógeno cortado con la misma enzima de restricción
ADN exógeno
Molécula de ADN recombinante
Paso 3. La ADN ligasa cataliza la unión de las dos cadenas.
Mediante esta tecnología se pueden obtener fragmentos de ADN que lleven incorporado un gen o unos genes de interés: por ejemplo, el que codifica para la insulina humana. Este transgén puede incorporarse a las células de otros organismos donde se expresará.
Gen ampR
CLONACIÓN DE UN GEN HUMANO
Se mezclan los plásmidos recombinantes obtenidos con las bacterias que deben incorporarlos y luego se siembran en un medio de cultivo para obtener muchas copias del gen de interés.
Las bacterias expresarán el gen que hemos introducido en el plásmido recombinante y así conseguiremos obtener la proteína que buscamos.
TÉCNICA DE LA PCR
Cuando la muestra de ADN es muy escasa, el método de la clonación no es válido para obtener una cantidad suficiente de copias de un gen. En estos casos se utiliza otra técnica llamada reacción en cadena de la polimerasa (PCR: Polymerase Chain Reaction).
La PCR permite amplificar (copiar millones de veces) una muestra muy pequeña de ADN.
5’ 3’
3’ 5’
TÉCNICA DE LA PCR
La técnica de la PCR tiene múltiples aplicaciones en función del origen de la muestra de ADN:
INGENIERÍA GENÉTICA Y MEDICINA
Muchas proteínas, cuya carencia origina una enfermedad en el hombre, se obtienen hoy en día mediante técnicas de ingeniería genética. Es el caso de la insulina, el interferón, la hormona de crecimiento, los factores de coagulación sanguínea (p.ej. el factor VIII), las vacunas…
La farmacogenética es una disciplina de la farmacología (estudio de los mecanismos de acción de los fármacos) que aplica los conocimientos del genoma humano para diseñar, elaborar y fabricar productos farmacéuticos personalizados en función de las proteínas sintetizadas por cada individuo a partir de su genoma.
Ingeniería genética y medicina
Los seres humanos somos, en un 99,9 %, genéticamente idénticos. Sin embargo, el 0,1 % de las bases difieren de un individuo a otro y estas secuencias diferentes se encuentran localizadas en unas regiones cromosómicas concretas que pueden ser utilizadas como marcadores genéticos. Los marcadores son huellas genéticas que se utilizan en medicina forense para identificar restos humanos y en pruebas de paternidad.
INGENIERÍA GENÉTICA Y MEDICINA
Es una técnica terapéutica que consiste en la inserción de un gen funcional en células de un paciente humano para corregir un defecto genético o para dotar a las células de una nueva función. Se utiliza para curar enfermedades hereditarias y adquiridas, causadas por un único gen recesivo
INGENIERÍA GENÉTICA Y MEDICINA
LA TERAPIA GÉNICA SE PUEDE REALIZAR DE VARIAS FORMAS:
Se extraen las células del paciente mediante biopsia, se modifican genéticamente en el laboratorio y se reintegran al organismo de procedencia.
La transferencia de los genes terapéuticos se realiza directamente al paciente mediante un vector (un virus o un liposoma), por inyección intravenosa o mediante aerosoles vía pulmonar, para que así lleguen al tejido o las células diana.
En los casos en que las células diana del paciente son difíciles de extraer y reimplantar, se introducen los genes funcionales directamente en el órgano afectado.
INGENIERÍA GENÉTICA Y MEDICINA
Los niños burbuja padecen una enfermedad llamada inmunodeficiencia combinada severa (SCID) por la que su sistema inmunitario es incapaz de generar linfocitos, careciendo por tanto de ningún tipo de respuesta inmune específica contra las infecciones.
Al carecer de todo tipo de defensa inmune es necesario mantener a los niños en una atmósfera estéril a la espera de un trasplante de médula ósea.
Dado que el trasplante no siempre es eficaz y es difícil encontrar al donante compatible, se está utilizando la terapia génica ex vivo: se introduce una copia normal del gen defectuoso en células indiferenciadas de la médula ósea del paciente y se reimplantan.
“LOS NIÑOS BURBUJA”
INGENIERÍA GENÉTICA Y AGRICULTURA
Desde siempre el hombre ha tratado de mejorar el rendimiento de los cultivos, por ejemplo seleccionando las semillas de las plantas más resistentes a enfermedades, las plantas con frutos más carnosos o lustrosos o las plantas mejor adaptadas a las condiciones climáticas.
Mediante la ingeniería genética se puede introducir en una planta ADN de otra especie, incluso procedente de animales y bacterias, y conseguir plantas mejoradas. Son las plantas transgénicas. De esta forma surgen nuevas características como:
Resistencia a herbicidas. Los herbicidas son sustancias que matan las malas hierbas de los cultivos, es decir, plantas no deseadas que crecen y compiten por los nutrientes del suelo con las plantas del cultivo. Los herbicidas no son selectivos al 100%, por lo que su empleo supone la pérdida de un 10 % del cultivo que muere bajo su efecto.
En la actualidad se comercializan plantas modificadas genéticamente resistentes a infecciones víricas, a herbicidas o larvas de insectos. Un ejemplo es el maíz transgénico, que contiene el gen de la toxina de la bacteria Bacillus thuringiensis, que actúa como insecticida porque destruye las larvas de muchos insectos, pero es inocua para el hombre.
INGENIERÍA GENÉTICA Y AGRICULTURA
Maíz transgénico que produce una sustancia insecticida
Tomate transgénico con más carne, menos pulpa y sin semillas.
INGENIERÍA GENÉTICA Y MEDIOAMBIENTE
Microorganismos modificados genéticamente están siendo utilizados para eliminar del medio ambiente productos contaminantes, ya que tienen la capacidad de transformarlos en sustancias no contaminantes o de adsorberlos. Su acción se realiza de dos formas:
Biorremediación por biodegradación: Existen bacterias que, de forma natural, son capaces de degradar la materia orgánica. Mediante ingeniería genética se pueden modificar para que puedan hacerlo con un mejor rendimiento y en condiciones ambientales diversas. Por ejemplo hay una estirpe de la bacteria Pseudomonas modificada genéticamente que es capaz de degradar eficazmente los hidrocarburos, por lo que se utiliza en la limpieza de los vertidos de petróleo.
Biorremediación por bioadsorción. La eliminación de metales pesados que contaminan el suelo se produce mediante la utilización de bacterias genéticamente modificadas capaces de adsorber (fijar en la superficie celular) esos metales.
INGENIERÍA GENÉTICA Y GANADERÍA
Los animales transgénicos (aquellos que portan en su genoma algún gen extraño) se obtienen mediante técnicas de ingeniería genética con dos objetivos fundamentales:
El procedimiento de obtención de sustancias de interés terapéutico a partir de un animal transgénico sigue los siguientes pasos:
INGENIERÍA GENÉTICA Y GANADERÍA
CLONACIÓN DE ANIMALES
La clonación permite obtener individuos genéticamente idénticos entre si e idénticos al organismo original del que proceden. La clonación reproductiva en animales persigue la creación de individuos genéticamente idénticos a partir de una célula adulta. El método más utilizado en esta clonación es la transferencia nuclear.
1. Se extrae una célula somática (2n) del individuo que se quiere clonar.
2. Se extrae un óvulo (n) de una hembra donante y se elimina el núcleo.
3. Se reemplaza el núcleo del óvulo por el núcleo de la célula somática.
4. Se desarrolla la “célula creada” hasta formar un embrión.
5. Se implanta en el útero de una hembra de la misma especie.
La descendencia será idéntica genéticamente al donante de la célula somática.
CLONACIÓN Y BIOÉTICA
La clonación terapéutica consiste en la creación de embriones por clonación para después utilizarlos como materia prima en distintas terapias.
La Bioética se define como la aplicación de la ética a las ciencias. La Bioética trata de congeniar los avances tecnológicos con la dignidad humana, mediante una reflexión sobre los límites de la aplicación de los descubrimientos.
En España se encuentra vigente desde 2007 La Ley de Investigación Biomédica, que pretende controlar las investigaciones científicas salvaguardando la dignidad y el respeto por las personas. En relación con la clonación esta ley: