Genom-Editierung mit CRISPR/Cas

“Eine neue Hoffnung” oder “Angriff der Klonkrieger”?

Anna Müllner, Katrin Leinweber, André Lampe

Genom-Editierung mit CRISPR/Cas

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CRISPR

Grundlagen

Die Wissenschaft

Ein Labor-Werkzeugkasten aus dem bakteriellen Immunsystem

Grundlage: DNA & ihre Veränderung

DNA

• DNA -> RNA
• DNA und RNA haben ein Leseraster
• 3 Basen = 1 Aminosäure
• Viele Aminosäuren = 1 Protein
• 4 Basen - 20 Aminosäuren

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Bakterielles “Immunsystem”

Jennifer Doudna, Emmanuelle Charpentier und Feng Zhang

Was ist CRISPR?

Jennifer Doudna, Emmanuelle Charpentier und Feng Zhang

Information zerstückeln

Abspeichern = CRISPR

CRISPR

Erkennen und Vernichten

CRISPR

Erkennungssequenz

• Cas9 schneidet am Basentriplett “NGG”
• Kommt in jedem Genom überall vor
• 20 Basen als Erkennungssequenz →guideRNA (LeitRNA)�→gRNA

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Mariuswalter [CC BY-SA 4.0; cropped] commons.Wikimedia.org/wiki/File:DNA_Repair.png

Grundlage: Anwendung

DNA

Cas

DNA-Bruch

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Modelle

Grundlagenforschung: Irgendwas ändern und gucken was passiert.

Technikvergleiche

• Cas9 ≆ Virenscanner mit gRNA als -signatur KonScience.de/kns029
• CRISPR-Cas als Werkzeug oft verglichen mit:

Aber bei “off-target effects” eher:

Daisy�Ginsberg�.com�/work�/crispr�-emoji

OTEs <= Diskussion über Nebenwirkungen

Forscher�geist.de�/podcast�/fg064

Es geht aber noch genauer

• Cas9 hat eine gewisse Fehlertoleranz
• ⇒Bioinformatik-Tools (GitHub.com/topics/crispr)

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• Cas9-Nickase
• Basiert auf 2x 20 Basen langer gRNA

• Unterschiedliche Cas-Proteine schneiden unterschiedlich spezifisch
• Anti-CRISPR-Proteine

Ulaganathan et al 2017, cropped. doi.org/10.1016/j.rser.2017.01.028

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CRISPR

Grundlagen

Die Wissenschaft

CRISPR erleichtert die Grundlagenforschung �(günstig, schnell, präzise)

CRISPR in der Medizin

Spezifischer Helfen

CRISPR in der Medizin

• Ist eine Heilung genetischer Krankheiten möglich?
• Theoretisch ja, wenn:
• Monogenetisch - nur ein Gen betroffen
• Häufig dieselbe Mutation
• Kein GenDoping

• Wie kommt CRISPR/Cas in die Zelle?
• Stammzellen aus dem Körper gewinnen, extern behandeln und zurückführen

Klinische Studien

• Ca. 20 erste Studien zu CRISPR auf Clinicaltrials.gov gemeldet
• Erschaffung von CAR-T-Zellen gegen Krebs
• Immunzellen werden aus dem Patienten gewonnen, verändert und wieder zugeführt
• Bereits zugelassene Therapie aber neuer Weg über CRISPR
• β-Thalassämie
• HPV

Map from clinicaltrials.gov

Phenylketonurie

PKU hat >850 mögliche, krankheitsverursachende Mutationen

Disclaimer: Zu den Kunden von Annas Arbeitgeberin gehört eine Firma, die Produkte für PKU herstellt.

Villiger et al. (2018) doi.org/10.1038/s41591-018-0209-1

Keimbahn

• CRISPR-Anwendung in Embryo, Spermium oder Eizelle
• CRISPR-Veränderung in fast jeder Zelle des Lebewesens
• Potential:
• Erbkrankheiten könnten so genetisch korrigiert werden
• Erfolgsquote derzeit ca 70 % (Ma, 2017)
• Ist das sinnvoll?
• Jedes Gen ist bei uns doppelt vorhanden (Ausnahme bei Männern, X-Chromosom)
• Evtl. weniger kontrovers: �Gesunde Embryonen durch Präimplantationsdiagnostik selektieren*

*Nur möglich wenn beide Elternteile ein gesundes Gen vererben können.

• Ethische Probleme
• Entsorgung
• CRISPR: Off-target-effects, Einverständniserklärung

Moratorien zur Keimbahn-�therapie

“[won’t] fund any use of gene-editing technologies in human embryos”

Tetsuya Ishii (2017) Germ line genome editing in clinics. doi.org/10.1093/bfgp/elv053

“[won’t] fund”

“Cooperate on establishing a shared, global standard!”

BioHacking

Safe, sane, consensual

CRISPR in der Medizin

Spezifischer Helfen

Für manche Erkrankungen durchaus vorstellbar

Im Embryo nicht unbedingt notwendig/nötig

Bio-Hacker-Ethik?

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CRISPR Babys

wo wir gerade von Ethik reden…

technologyreview.com/s/612458/

WTF did He do?

• Anscheinend erste CRISPR Babys, Lulu & Nana
• CCR5 deaktiviert
• HI-Virus 1 benutzt CCR5 zur Infektion einer Zelle
• Vorgehen “amateurhaft”, nix veröffentlicht bisher
• “Probleme” mit Einverständniserklärung
• Experimente geheim & geplante PR-Kampagne
• Noch viel mehr…

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• CCR5 ausschalten ≠ immun gegen HIV
• Kanonen auf Spatzen.

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Dr. Jiankui He

(Bild CC BY 3.0, Wiki Commons, usr: Begoon)

Mehr Einordnung: Ed Young (@edyong209), the Atlantic:

theatlantic.com/science/archive/2018/12/15-worrying-things-about-crispr-babies-scandal/577234/

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Twitter-Thread von @GaetanBurgio: twitter.com/GaetanBurgio/status/1067657557114679296

CRISPR Babys

wo wir gerade von Ethik reden...

Anscheinend erste CRISPR Babys geboren

Zielsetzung vollkommen seltsam

Vorgehen mindestens bemerkenswert...

CRISPR in der Landwirtschaft

Zucht idealer Sorten

Zucht idealer Sorten

Nährstoffe & Aroma, Allergene

Wachstum & Lagerfähigkeit

Anpassung an Klimawandel

doi.org/10.1111/nph.14702, �016/j.plantsci.2016.12.012 & �042/ETLS20170033

Atlassian.com/�git/tutorials �(CC-BY 2.5 AU)

Flickr.com/OakRidgeLab CC BY 2.0

nützliche Eigenschaft

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Mutation

Bio-�infor-�matik (ΩΤ292)

Stoffwechsel verstehen

ideale Sorten

Genom- �sequen-�zierung

Zucht-sorten

Wild-�sorten

CRISPR�-Cas9

Wild- zu Kirschtomate editieren

Zsögön et al. (2018) �doi.org/10.1038/nbt.4272

Geschäftsmodelle attackieren?

• Hybrid-Saatgut: einmalig hoher Ertrag, aber jährlicher Neukauf

• editierter Reis-Hybrid erzeugt Körner klonal & behält Ertragsleistung

Khanday et al. (2018) doi.org/10.1038/s41586-018-0785-8

Bestäubung& erneute Aussaat

Rechtslage zu Genom-editierten Organismen

Mutagenese

Chemikalien

… weil�schnell & �einfach:�Vorsorge-�prinzip!

Genom-�Editierung

via Paige Johnson

Mariuswalter [CC BY-SA 4.0; cropped] commons.Wikimedia.org/wiki/File:DNA_Repair.png

Gen-Transfer (“klassische Gentechnik”)

atomic gardening

GMO-§§§

Ausnahme-§

EuGH �C-528/16

CRISPR in der Landwirtschaft

Zucht idealer Sorten

Zucht- & Wildsorten mit nützlichen Mutationen upgraden�

Wessen Ideale werden unter strenger EU-§ nun umgesetzt?

Zusammenfassung CRISPR/Cas

• günstig, schnell, präzise
• Cas markiert Schnittstellen
• Reparaturvorlage mitliefern → fertig.

Zusammenfassung CRISPR/Cas

• günstig, schnell, präzise
• Cas markiert Schnittstellen
• Reparaturvorlage mitliefern → fertig.

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• erleichtert Grundlagenforschung

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• könnte manche Krankheiten heilen

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• Eingriff in Keimbahn nicht nötig

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• CRISPR babies = why?

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• gerichtet züchten könnte jeder

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• Landwirtschaft: Rechtslage… interessant (ähnlich wie LSR & ©-Filter)

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Was kann CRISPR/Cas? Was kann es nicht?

Forschung beschleunigen

Grundlagenforschung

Angewandte Forschung

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Nichts heilen was nicht genetisch ist

Nicht alle genetischen Krankheiten heilen

Nichts “verbessern” wie Größe, Intellekt, etc.

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Ein Werkzeug…

...ein mächtiges Werkzeug

Erste klinische Studien zu Therapie-Ansätzen

Nahrungspflanzen

Anscheinend Embryonen editieren

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Welche Fragen Genom-Editierung aufwirft:

• Welcher Ethik folgen wir?
• Angst vorm Unbekannten…?
• Akzeptanz durch Passivität?
• Wer sollte was entscheiden?
• Reaktionsgeschwindigkeit von Gesetzgebung auf Wissenschaft?
• Patene und Monopole durch Konzerne?

• Atomic gardening is OK, aber gezielte Mutagenese nicht?
• CRISPR hat Demokratisierungs- & Dezentralisierungspotential. → Wie kann man das nutzen?
• Warum leisten wir uns “Locked up science” bei solchen Themen?
• Können wir das als Gesellschaft überhaupt noch diskutieren?

Herzlichen Dank fürs Zuhören!

CRISPR/Cas ist ein Werkzeug.

Was wir damit tun - darüber müssen wir reden.

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Anna: zellmedien.de

scilogs.spektrum.de/lifescience

@_adora_belle_

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André: andre-lampe.de

wirkstoffradio.de

@andereLampe

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Katrin: KonScience.de

CRISPR-Cast.de

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Bitte sprecht uns an - wir sind oft hier (35c3):

​

Sendezentrum, Jugend hackt, online.

Appendix

But wait, there is more!

Kritik an der Rechtslage zu GE-Organismen

GE-Produkte “indistinguishable from … traditional breeding methods” => keine GMO-§ (press release 0070.18)

keine GE-spezifischen Gesetze theBulletin.org/2018/06/crispr

“detectability … is not significantly different �from that of GMOs”

doi.org/10.3389/fbioe.2018.00079 �> “Product Monitoring”

“GMOs are not per se more risky than e.g. conventional plant breeding” �A decade (2001 - 2010) of EU-funded GMO research

EuGH �C-528/16

“GE-Prozess birgt mit GMO vergleichbare Risiken” => GMO-§

GMOs in der EU: Fast nur fürs Geschäftsmodell

GMO-Sorge als selbsterfüllende Prophezeiung

1. Bevölkerung lehnt Gentechnik ab

2. Gesetzgeber erlässt strenge GT-§

3. teure & aufwändige Zulassungsverfahren

4. nur Groß-�konzerne bestreiten ZV…

5. …und fast nur bei für sie sicher profitabler GT

6. Bevölkerung: “GT bringt uns keinen Nutzen!”

EC.Europa.eu/food�/dyna/gm_register�/index_en.cfm

Unis, KMUs, Vereine, … raus

Vorsorgeprinzip eigentlich :-)

Übervorsicht => Entsorgung von Ideen

bekannter Bedarf beim Kundenstamm

Gene Drives

Durch die freie Wildbahn

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Gene Drives ignorieren Mendel’sche Vererbung

CC BY 4.0 via commons.Wikimedia.org

Esvelt, Smidler et al. (2014) doi.org/10.7554/eLife.03401

Cas9-Drive lässt sich auf andere Chromosomen kopieren

optimierbar

100%

25% 50% 25%

Gene Drives tricksen Evolution aus

• selbst bei geringerer Fitness der “Infizierten”
• nicht für Nutztiere/-pflanzen, sondern gegen “Schädlinge” in freier Wildbahn
• unklare Effekte in komplexen Ökosystemen & Nahrungsnetzen

Esvelt, Smidler et al. (2014) doi.org/10.7554/eLife.03401

100%

Gene Drives

Evolution austricksen

gegen diverse “Schädlinge” im Labor

UN (Konvention zur Biodiversität): “case-by-case risk assessment [and] management [with] informed consent [of] potentially affected […] communities” (CBD/COP/14/L31)

Sorge um Keimbahnmutation? Willkommen im Club!

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Vokabular für @c3lingo

Grundlagenforschung – basic research

Vorsorgeprinzip – precautionary principle

Angriff der Klonkrieger – Attack of the clones

Indels – (auch “indels”- Einfügung/Löschung)

Leseraster – Reading Frame

Basentriplett/Codon – triplet/codon

(Endo)nuklease – (endo)nuclease

Aminosäure – Amino acid

Einverständniserklärung – informed consent

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