1 of 35

Практична робота №2

Методи фарбування мікроорганізмів

2 of 35

  • Мета роботи: 

ознайомитись з простими та складними методами фарбування бактерій, опанувати методи діагностичного фарбування, зокрема метод фарбування за Грамом

3 of 35

4 of 35

Загальні відомості

Для виявлення деяких морфологічних особливостей мікроорганізмів, перевірки чистоти культури й інших цілей готують фіксовані зафарбовані препарати, що можуть зберігатися тривалий час. Готування таких препаратів включає наступні етапи: готування мазка, висушування, фіксація і фарбування

5 of 35

  • Фарбування. Для простого фарбування клітин найчастіше користуються одним аніліновим барвником (фуксином, метиленовим синім), для складного - декількома. Фіксований препарат поміщають на рівнобіжні скляні рейки містка, що лежить на стінках скляної ємкості й обливають з піпетки декількома краплями розчину обраного барвника. Варто звертати увагу на те, щоб кінець піпетки не торкався мазка.

6 of 35

  • Тривалість фарбування – від декількох секунд до 1...3 хв. Необхідно стежити, щоб під час фарбування розчин барвника на мазку не підсихав, і в разі потреби доливати нові порції.
  • По закінченні фарбування препарат промивають струменем води доти, доки стікаюча вода стане безбарвною. Потім препарат висушують на повітрі або обережно промокають фільтрувальним папером і розглядають з імерсією.

​

7 of 35

Фарбування бактерій за Грамом

  • Неоднакове відношення мікроорганізмів до фарбування за Грамом пов’язано з розбіжностями в структурі і хімічному складі клітинної стінки бактерій.

8 of 35

  • До грампозитивних мікроорганізмів належать коки, бацили (спороутворювальні палички), актиноміцети, мікобактерії, клостридіальні бактерії (у молодому віці).
  • До грамнегативних мікроорганізмів належать: бактерії (аспорогенні палички, наприклад E.coli), спірили, сальмонели, псевдомонади, азотобактер, вібріони.

​

9 of 35

Існують грамваріабельні мікроорганізми, відношення яких до фарбування за Грамом змінюється на певних етапах їх життєвого циклу. Оскільки здатність клітин забарвлюватися за Грамом залежить від віку культури, для фарбування за Грамом використовують клітини молодої культури, найчастіше однодобової.

10 of 35

Техніка фарбування бактерій за Грамом

На одному знежиреному предметному склі готують три мазки з різних культур. У центрі наносять мазок досліджуваного мікроорганізму, ліворуч і праворуч – мазки контрольних мікроорганізмів (грампозитивні – сарцини, стафілококи; грамнегативні – кишкова паличка). Мазки висушують на

повітрі, фіксують над полум’ям пальника.

​

11 of 35

12 of 35

13 of 35

14 of 35

15 of 35

16 of 35

17 of 35

18 of 35

19 of 35

20 of 35

21 of 35

22 of 35

23 of 35

24 of 35

25 of 35

26 of 35

27 of 35

28 of 35

29 of 35

30 of 35

31 of 35

Грампозитивні зберігають фіолетовий колір. Грамнегативні виглядають рожевими. Подальша класифікація полягає у визначенні форми бактерії. Часто це бувають коки (округлі) і бацили (паличкоподібні). 

32 of 35

33 of 35

34 of 35

Поради

  • Використовуйте тільки чисті предметні скла.
  • Не перегрівайте.
  • Змивайте обережно.
  • Мазок повинен бути тонким.
  • Готуйте зразок правильно.
  • При знебарвленні етиловий спирт діє повільніше, ніж ацетон.
  • Дотримуйтесь заходів обережності, і обов'язково надягайте рукавички.
  • Предметне скло можна вимити або використовувати тільки нові.

​

35 of 35

Дякую за увагу)