ANTIBIOGRAMAS

Janet Salazar L.

Bacterióloga

I.U.C.M de A.

��OBJETIVO RECOMENDACIONES

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• No realizar a flora colonizante o contaminante. Solo cultivos puros y no mas de 24 horas de crecimiento.
• Es necesario que el antibiograma se realice a partir de cultivos monocrobianos o al menos, con colonias bien aisladas de un solo tipo de microorganismos

IMPORTANCIA

El estudio de la sensibilidad bacteriana a los antibióticos es una de las funciones más importantes de los laboratorios de microbiología clínica

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• Dirigir la terapéutica una vez que el germen es conocido

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• Estudios de resistencia

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• Predecir el resultado del tratamiento con los antimicrobianos examinados

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MÉTODOS DE ESTUDIO DE SENSIBILIDAD BACTERIANA

• MÉTODOS CUANTITATIVOS
• MÉTODOS CUALITATIVOS

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• MÉTODOS CUANTITATIVOS

son aquellos procedimientos que permiten determinar la concentración inhibitoria mínima (CIM)

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QUE ES CIM

Se define CIM como la mínima concentración de antibiótico que en un período de tiempo predeterminado, es capaz de inhibir el crecimiento in vitro de un inóculo bacteriano

previamente estandarizado (concentración conocida de gérmenes)

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• Métodos cualitativos (disco difusión) Kirby Bauer

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son aquellos procedimientos que permiten clasificar

directamente a un microorganismo como sensible o resistente

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OTROS METODOS:

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• gradiente de antibiótico (E-test)
• métodos automatizados (Vitek, MicroScan, Phoenix)

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Rapidez vs precisión

SELECCIONAR LOS�ANTIBIÓTICOS A ESTUDIAR Y REPORTAR

• Cada laboratorio con los médicos tratantes y farmacia

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• Tabla de antibióticos por tipo de bacteria y origen de la muestra

Estandarización

• tipo de bacterias a estudiar (cto de los Mos)
• medios de cultivo para realizar las pruebas caldo Mueller Hinton (MH) AGAR m. HINTON
• parámetros del medio a controlar:

PH, HUMEDAD

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DEL MEDIO CULTIVO:

Prepararse según las indicaciones del fabricante

• El espesor del mismo debe oscilar entre 3 y 5 mm.
• No mas de 7 días de preparación.

3. El tiempo de incubación

4. La temperatura de incubación,

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5. El estado de los antibióticos

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método de difusión en disco

para microorganismos no exigentes de crecimiento rápido.

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Fundamento:

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“ consiste en depositar en la superficie de una

placa de agar MH previamente inoculada con el microorganismo, discos de papel de filtro

impregnados con los diferentes antibióticos

Una vez impregnado en antibiótico

se pone en contacto con la superficie húmeda del agar, el filtro absorbe agua y el antibiótico

difunde por el agar, formándose un gradiente de concentración. Transcurridas 18 a 24 horas

de incubación, los discos pueden o no aparecer rodeados por una zona de inhibición de crecimiento bacteriano. “

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TECNICA:

• preparación del inóculo:

hacer una suspensión de la bacteria en el caldo- comparar si la suspensión obtenida tiene una turbidez similar al tubo patrón (tubo 0.5 de la escala de Mac-Farland) suspension directa o incubar ?? 2-5 horas

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Si es necesario diluir para igualar la suspensión a la del tubo patrón puede utilizarse BHI o solución salina estéril

Patrón de turbidez:

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para estandarizar la densidad del inóculo se usa una suspensión de

sulfato de bario como estándar de turbidez que corresponde a un 0,5 del nefelómetro de Mc Farland. La densidad se corrobora con un espectrofotómetro

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Esta turbidez corresponde a 1.5 x 108 UFC/ml.

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La finalidad es establecer una relación entre una precipitación química y una suspensión bacteriana.

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patrón Mc Farland sirve para cuantificar el grado de crecimiento microbiano in vitro

• Sumergir un hisopo de algodón estéril dentro de la suspensión preparada.
• Realizar siembra masiva en las cajas –dejar secar 3-5 min
• Colocar los discos dentro sobre la superficie del agar
• Incubar las cajas a temperatura de 35 - 37C durante un tiempo de 16-24 horas.
• Para medir los halos puede emplearse una regla de medición común, la lectura puede hacerse por observación visual, incluyendo en el diámetro total que se observa el tamaño del disco que es de 6 mm.

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MEDICIÓN DE LOS HALOS E INTERPRETACIÓN DE LOS MISMOS

• corroborar que las cepas ATCC( rango)
• lectura de los antibiogramas( medición de los halos de Inhibición)
• Al igual que para las ATCC, existen tablas proporcionadas por la CLSI(Según el diámetro del halo de inhibición de crecimiento bacteriano, definen categorías de resistencia, sensibilidad y sensibilidad intermedia.

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Se reportará la sensibilidad como:

Sensible

resistente

intermedio

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De acuerdo al antibiótico y germen analizado.

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QUE ANTIOBIOTICOS COLOCAR

Dependiendo del microorganismo

RECOMENDACIONES GENERALES

• Conservación discos antibioticos
• Colocar los discos-presionar

Deben estar a más de 15 mm del borde de la placa y deben distribuirse de manera de que no haya superposición de los halos de inhibición

En las placas de 150 mm no se colocarán más de 12 discos

en las placas de 100 mm no es aconsejable

colocar más de 6.

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• PREPARACION DEL INOCULO

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• COMPOSICION Y ESPESOR DEL MEDIO

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• TEMPERATURA Y TIEMPO DE INCUBACION

VENTAJAS

• método sencillo
• barato
• fácil control y estandarización.

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CONTROL DE CALIDAD

“Los resultados aceptables derivados de las cepas del control de calidad no garantiza resultados confiables con todos los aislamientos de los pacientes. Cuando se presenten resultados atípicos se deben repetir o repetir la identificación. Cada laboratorio debe desarrollar sus propias políticas en la verificación”

CLSI

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