Identificación de micobacterias

Dr. Armando Guevara P.

Microbiólogo Clínico

Género Mycobacterium

• Género Mycobacterium: >100 especies
• Complejo tuberculosis
• Complejo lepra
• Otras micobacterias

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PARED CELULAR

Fuente:. McMurray. 2000

Superficie

Citoplasma

Lípidos

superficiales

Ácido

micólico

Arabinogalactan

Peptidoglicano

Membrana

celular

LAM

DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

• Baciloscopía
• Cultivo

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• Técnicas moleculares

Fenotipia

Bioquímica

DIAGNÓSTICO MOLECULAR

IDENTIFICACIÓN FENOTÍPICA

• Tinción de ácido alcohol resistencia
• Temperatura de crecimiento

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• Velocidad de crecimiento

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• Morfología de las colonias

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• Pigmentación
• Fotorreactividad

Rápido

Lento

Fotocromógenas

Escotocromógenas

No cromógenas

BACILOSCOPÍA

• Coloraciones de Ziehl Neelsen y Kinyoun
• Fundamento:

Unión de fucsina y complejos micolil - arabinogalactano

COLORACIÓN DE ZIEHL NEELSEN

BACILOSCOPÍA

• No es diagnóstica de M. tuberculosis

Otros ácido resistentes:

Otras micobacterias Tsukamurella

Nocardia Cryptosporidium

Legionella Isospora belli

Rhodococcus Cyclospora

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• Ausencia de BAR no descarta enfermedad

10.000 bacilos por ml de esputo

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​

BACILOSCOPÍA

Otra técnica:

Uso de colorantes fluorescentes Auramina - Rodamina

CULTIVO

• Requieren medios complejos
• Crecimiento depende de velocidad de crecimiento.
• M. tuberculosis: lento 3 a 6 semanas a 37ºC por tasa de duplicación de 18 horas
• CO2 a 5-10% favorece crecimiento
• Medios: sólidos líquidos

selectivos no selectivos

CULTIVO

• Descontaminación
• Homogeneización (fluidificación o digestión)
• Concentración

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AGENTES MAS USADOS PARA DESCONTAMINACIÓN

• N-acetil-L-cisteína mas 2% de NaOH
• Ditriteitol mas 2% de NaOH
• Fosfato trisódico al 13% mas cloruro de benzalconio
• NaOH al 4%
• Fosfato trisódico al 13%
• Ácido oxálico al 5%
• Cloruro de cetilpiridio al 1% más 2% de NaOH

MEDIOS DE CULTIVO

• Lowenstein Jensen
• Middlebrook 7H10 - 7H11
• American Thoracic Society
• Petragnani
• Ogawa-Kudoh

Colonias de M. tuberculosis

en medio Lowenstein Jensen

MEDIOS NO SELECTIVOS PARA

AISLAMIENTO DE MICOBACTERIAS

MEDIOS SELECTIVOS PARA

AISLAMIENTO DE MICOBACTERIAS

MÉTODOS BIOQUÍMICOS

• Acumulación de niacina
• Reducción de nitratos
• Hidrólisis del Tween 80
• Arilsulfatasa
• Catalasa
• Ureasa
• Pirazinamidasa
• Resistencia al T₂H
• Crecimiento en MacConkey sin cristal violeta
• Crecimiento en NaCl al 5%
• Reducción de telurito

MICOBACTERIAS NO TUBERCULOSAS SEGÚN VELOCIDAD

DE CRECIMIENTO Y PRODUCCIÓN DE PIGMENTO

Fuente: Casal et al, 1999

Continuación

PRUEBAS MOLECULARES

• Sondas de ácidos nucleicos
• Secuenciación de ácidos nucleicos
• Polimorfismo de fragmentos de restricción (PRA)
• Polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP)
• Tipiaje de oligonucleótidos espaciadores (Spoligotyping)

Micobacterias ambientales

Micobacterias ambientales o no tuberculosas

• Ampliamente distribuidas en la naturaleza: agua, suelos, plantas, etc.
• Usualmente no infectan al hombre
• Las enfermedades causadas son llamadas micobacteriosis
• Factor predisponente: inmunocompromiso local o sistémico

Infecciones por micobacterias atípicas posterior a mesoterapia

Dr. Armando Guevara

Lic. Ismar Rivera

Lic. Arnelly Escalona

Dr. Jacobus de Waard

Mesoterapia

• Tratamiento alternativo
• Control de síndromes dolorosos
• Inyecciones VID 0,05 - 0,1ml
• Uso actual:

Afecciones cutáneas

Estética

Objetivo

Caracterizar desde el punto de vista clínico, epidemiológico y microbiológico a pacientes con infección posterior a mesoterapia, que acudieron al Laboratorio de Tuberculosis del Instituto de Biomedicina entre Marzo 2002 y Diciembre 2003.

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METODOLOGÍA

Metodología

Pacientes:

• Pacientes con lesiones nodulares y abscedadas posterior a mesoterapia
• Ficha clínica: identificación, descripción de lesiones, cultivos previos, lugar y fecha del procedimiento, responsable de mesoterapia

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Metodología

Procesamiento microbiológico:

• Muestras
• Baciloscopía (Zielh Neelsen)
• Inoculación en medios para micobacterias
• Identificación de cepas recuperadas por PCR:

Polimorfismo de longitud de los fragmentos de restricción del gen hsp65 (PRA)

Metodología

Investigación de fuente de infección:

• 15 sustancias para mesoterapia
• Medios de cultivo para bacterias de crecimiento rápido, micobacterias y hongos
• Identificación de cepas recuperadas:

Métodos clásicos

Por PCR (PRA)

RESULTADOS

Pacientes evaluados según sexo. Laboratorio de Tuberculosis. Instituto de Biomedicina. Marzo 2002-Diciembre 2003

Clínica

Inicio de síntomas:

• 2 a 8 semanas

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Regiones afectadas

• Cara
• Cuello
• Muslos
• Glúteos
• Abdomen

Relación epidemiológica entre pacientes

• 21 pacientes agrupados en brotes

15 pacientes

4 pacientes

2 pacientes

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Cada brote:

• Pacientes tratados por misma persona
• Con el mismo producto
• Se aisló la misma especie

Pacientes evaluados según tratamientos previos recibidos. Laboratorio de Tuberculosis. Instituto de Biomedicina. Marzo 2002-Diciembre 2003

Estudios Bacteriológicos

Previos:

• Se realizaron en 29 pacientes
• 82,5% resultado negativo

Durante investigación:

• Todos negativos

Estudios para micobacterias

Baciloscopía:

• Valor escaso: 8% positivas (4/49 pacientes)

Cultivo:

• 81,6% positivos (40/49 pacientes)

Muestra ideal:

• Secreción de abscesos cerrados

Identificación de micobacterias aisladas

Polimorfismo de longitud de

Fragmentos de Restricción

del gen hsp65

Colonias de micobacterias

Especies de micobacterias aisladas en pacientes con infección posterior a mesoterapia Laboratorio de Tuberculosis. Instituto de Biomedicina. Marzo 2002-Diciembre 2003

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Mycobacterium cosmeticum sp. nov., a

novel rapidly growing species isolated from a cosmetic infection and from a nail salon

​

International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology (2004), 54 (6): 2385-91

Tratamiento y evolución

• Tratamiento especie – específico
• Resistentes a antituberculosos
• Tratamiento por 6 a 16 meses

Tratamiento y Evolución

• M. fortuitum: Ciprofloxacina + Amikacina mantenimiento con Ciprofloxacina
• M. abscessus: Amikacina + Claritromicina mantenimiento con Claritromicina.
• M. chelonae: Tobramicina + Claritromicina mantenimiento con Claritromicina

Brown-Elliott BA, Wallace RJ. Clin Microbiol Rev. 2002. 15(4):716-46.

Tratamiento y Evolución

• M. peregrinum: Ciprofloxacina + Amikacina mantenimiento con Ciprofloxacina
• M. simiae: Claritromicina
• M. cosmeticum: Ciprofloxacina

Brown-Elliott BA, Wallace RJ. Clin Microbiol Rev. 2002. 15(4):716-46.

Tratamiento y Evolución

• Recaídas frecuentes
• Cicatrices retráctiles, hiperpigmentadas con depresiones centrales

Lesión en muslo luego de

8 meses de tratamiento

Fuente de Infección

15 productos:

• Formulas magistrales
• L-carnitina
• Lidocaína
• Silicio orgánico
• Extracto de alcachofa

Fuente de infección

• Cladosporium sp
• Aspergillus terreus
• Rodothorula rubra
• Enterobacter agglomerans
• Burkholderia cepacea
• Serratia odorifera
• Mycobacterium abscessus
• M. fortuitum

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Frasco de lidocaína del cual se aisló M. fortuitum

Pacientes evaluados según persona que administró la mesoterapia. Laboratorio de Tuberculosis. Instituto de Biomedicina. Marzo 2002-Diciembre 2003

Conclusión

• Terapias alternativas tienen alto riesgo

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• Lesiones que no respondan a tratamiento convencional podrían ser causadas por micobacterias