Суспензійні культури
- це окремі клітини або групи клітин, які вирощуються у зваженому стані в рідкому середовищі
Переваги суспензійних культур над каллусами
повний контроль і вплив на метаболізм
ріст клітинних ліній екзогенними факторами
можливість необмеженого набору біомаси для отримання БАВ.
зручність для проведення біохімічних та молекулярно-біологічних досліджень
Типи суспензійних культур
Періодичні
Є закритими системами, містяться у колбах, що мають об'єм 200-250 мл.
Ростуть у рідкому поживному середовищі визначеного об'єму
Клітини досягають стаціонароної фази через те, що повністю вичерпали запас поживних речовин
До настання стаціонарної фази зазвичай утворюється 3-4 покоління клітин від початку поділу
Для пітримання культури необхідне переміщення аліквоти у свіже середовище
Типи суспензійних культур
Неперервні
є відкритими або закритими системами
свіже поживне середовище додається постійно
культури придатні для широкомасштабного культивування у біореакторах
у закритих культурах надходження свіжого поживного середовища збалансоване витоком старого поживного середовища
у відкритих культурах надходження свіжого середовища скомпенсоване відбиранням культури такого ж об'єму
неперервне культивування може здійснюватись у хемостаті або у турбідостаті
Біореактор
За ступенем агрегованості виділяють:�
складається з дрібних (40%) та великих (60%) агрегатів.
Великоагреговану суспензійну культуру
складається з одиночних клітин (40%), дрібних агрегатів (40%) та великих агрегатів (20%, агрегати містять понад 12 клітин)
Середньоагреговану суспензійну культуру
складається з одиночних клітин (40%) та дрібних агрегатів (60%, агрегати не повинні містити більше 10-12 клітин)
Дрібноагреговану суспензійну культуру
На ступінь агрегування впливають: склад живильного середовища;спосіб аерації і швидкість перемішування; співвідношення між біомасою клітин та обсягом свіжого середовища; частота субкультивування
Отримання суспензійних культур
Використовують калусну тканину пухкого типу при поміщенні її в рідке середовище, що перемішується.
Суспензії краще отримувати на середовищах 2,4 Д.
Час пасажу складає 14- 16 діб
Хорошою вважається суспензія, що складається з морфологічно вирівняних клітин, що мають невеликі розміри та агреговані в дрібні групи, що включають не більше 10 клітин.
Крива росту
Модельна ростова крива суспензійних культур має типову S-подібну форму, де розрізняють:
I - лаг-фазу;
II – експоненційну фазу;
III – фазу лінійного зростання;
IV-уповільненого зростання;
V - стаціонарну фазу;
VI – фазу відмирання
Турбідостатний метод�
В турбідостаті подавання свіжого живильного середовища та відбір суспензії відбувається при досягненні клітинних популяцій заданої щільності. Сигнал на включення протоку потрапляє від реле, який зв’язаний з оптичною системою, яка визначає щільність клітин
Хемостатний метод
В хемостаті швидкість протоку задається керівником процесу та від неї залежить швидкість росту клітинної біомаси. Для цього живильне середовище лімітується по одному з найважливіших факторів росту, частіше за все, NPK та цукру.
ПРАКТИЧНЕ ВИКОРИСТАННЯ СУСПЕНЗІЙНИХ КУЛЬТУР�
ДЯКУЮ ЗА УВАГУ!