1 of 6

Изучение цитотоксичности лекарственных средств, снижающих внутриглазное давление, �на культуре эпителиальных клеток роговицы человека

Фисенко Н.В., Суббот А.М., Осипян Г.А.

ФГБНУ «НИИ глазных болезней имени М.М.Краснова»

2 of 6

Актуальность

Цель - изучить влияние гипотензивных лекарственных средств, а также бензалкония хлорида, на первичную клеточную культуру эпителия роговицы человека in vitro.

  • Эпителиальный дефект (ЭпД) роговицы часто возникает при сквозной и послойной кератопластике (в раннем послеоперационном периоде или при несостоятельности трансплантата), а также при отеке роговицы, обусловленном дисфункцией ее эндотелиального слоя.
  • Глаукома, как одно из наиболее распространенных глазных заболеваний, может быть коморбидным состоянием ЭпД роговицы различной этиологии.
  • К основным методам снижения внутриглазного давления при глаукоме относят применение гипотензивных лекарственных средств (ЛС) в инстилляционной форме. В состав ЛС входят вспомогательные компоненты (в т.ч. бензалкония хлорид – БХ), обеспечивающие стабильность действующего фармакологического вещества и препятствующие росту микрофлоры. Вместе с тем, их цитотоксический эффект является фактором риска возникновения и персистенции ЭпД роговицы.

3 of 6

Материал и методы

МНН

Действующее

фармакологическое вещество

Вспомогательное вещество - Бензалкония хлорид

Владелец регистрационного

удостоверения

Дорзоламид

Дорзоламида гидрохлорид 20000 мкг/мл

-

Pharmaceutical Works "POLPHARMA", SA (Польша)

Дорзоламида гидрохлорид 20000 мкг/мл

75 мкг/мл

SANTEN, OY (Финляндия)

Бримонидин

Бримонидина тартрат 2000 мкг/мл

-

Pharmaceutical Works "POLPHARMA", SA (Польша)

Бримонидина тартрат 2000 мкг/мл

52 мкг/мл

БАУШ ХЕЛС (Россия)

Тимолол

Тимолола малеат 5000 мкг/мл

-

URSAPHARM Arzneimittel, GmbH (Германия)

Тимолола малеат 5000 мкг/мл

100 мкг/мл

SENTISS PHARMA, Pvt. Ltd. (Индия)

Первичная культура ЭпК роговицы человека (III пассаж)

  • Клеточная модель интактного эпителия роговицы человека – монослой ЭпК
  • Клеточная модель ЭпД роговицы человека – линейный дефект монослоя ЭпК
  • Действие ЛС на ЭпК изучали в разведениях 1/100, 1/50, 1/20, 1/10.
  • Влияние БХ (Merck KGaA, Германия) оценивали в концентрациях, соответствующих его содержанию в изучаемых разведениях ЛС.

4 of 6

Сравнительный анализ выживаемости ЭпК

после экспозиции (24 ч.) с ЛС, а также с БХ

по данным MTT-теста

5 of 6

Морфологическая картина монослоя ЭпК после 24 ч. экспозиции с ЛС (разведение 1/10) и БХ

  • Бримонидин, Дорзоламид, Тимолол (все ЛС без БХ в составе) приводят к разрежению межклеточных контактов ЭпК, компактизации ядра, цитоплазмы, появлению единичных апоптотических телец.
  • Бримонидин, Дорзоламид, Тимолол (все ЛС с БХ в составе), а также БХ, вызывают тотальную гибель ЭпК.

Морфологическая картина ЭпК восстановления монослоя ЭпК (модель линейного дефекта) после 48 ч. экспозиции с ЛС (границы дефекта – желтый пунктир)

  • Дорзоламид, Тимолол (ЛС с БХ в составе) в разведении 1/20 приводят к тотальной гибели ЭпК.

6 of 6

Заключение

  • Среди гипотензивных ЛС (без БХ) дорзоламид в разведениях 1/50, 1/20 и 1/10 вызывает слабые и умеренные патологические структурные изменения ЭпК, бримонидин – только в разведении 1/10, а тимолол ни в одном из указанных разведений не обладает цитотоксическим эффектом.
  • Дорзоламид, бримонидин и тимолол (все ЛС содержат БХ) в разведениях 1/100, 1/50, 1/20 и 1/10 вызывают повреждение ЭпК и снижение их метаболической активности в разной степени. БХ в концентрациях, соответствующих его содержанию в указанных ЛС, проявляет сходный цитотоксический эффект.
  • Патологическое действие дорзоламида, бримонидина и тимолола обусловлено наличием в их составе БХ, в связи с чем нежелательно назначение указанных ЛС при ЭпД роговицы различного генеза, в том числе после кератопластики.