И.С. Федоренко, В. А. Каширина, Е. В. Бутенко
Академия биологии и биотехнологии им. Д.И. Ивановского, ЮФУ
ПОИСК АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНОГО ЛОКУСА RS12976445 MIR125A С РЕПРОДУКТИВНЫМИ НАРУШЕНИЯМИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА
ВВЕДЕНИЕ.
ЦЕЛЬ.
Изучение распределения частот генотипов аллелей гена MIR125A (rs12976445) в группах женщин с бесплодием различной этиологии.
РЕЗУЛЬТАТЫ.
Распределения частот генотипов в исследуемых группах
и группе контроля представлены в виде диаграмм.
Распределение частот генотипов соответствует равновесию
Харди-Вайнберга, в группе с трубным фактором
бесплодия наблюдается отклонение (р=0,05), отклонение
также наблюдается в группе с эндометриозом (р= 0,0004)
Исследование выполнено при финансовой поддержке Российского научного фонда, проект № 23–15-00464.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
Сбор клинического материала проводили на базе Центра репродукции и ЭКО г. Ростова-на-Дону. Материалом для генетических исследований служила венозная кровь. В контрольную группу вошло 120 женщин с физиологической беременностью; в исследуемые группы вошло 95 женщин с мужским фактором бесплодия; 21 женщина с СПКЯ; 79 женщин с верифицированным диагнозом эндометриоза; 56 женщин с трубным фактором бесплодия; 19 женщин с ановуляцией; 19 женщин с бесплодием неясного генеза.
Генотипирование проводили методами аллель-специфической ПЦР с использованием реакционных смесей фирмы Евроген, Россия. Последовательности использованных праймеров: F(С) 5ʹ-TCTCAGAATGTCTCTGTGCCC-3ʹ; F (T) 5ʹ-CTCTCAGAATGTCTCTGTGCCT-3ʹ; R 5ʹ-CAGGTTTCAGTTGGTGGTCA-3ʹ. Протокол амплификации: 95°–5 мин; 40 циклов 95°–15 сек, 62°–15 сек, 72°-25 сек; 72°-1 мин; 10°- ∞ в объеме 25 мкл. Оценку различий в частоте генотипов производили с помощью критерия Хи-квадрат, с использованием калькулятора Gen Expert (84.201.145.131).
ВЫВОДЫ.
Статистически значимых отличий в исследуемых группах с СПКЯ, мужским фактором бесплодия, ановуляцией, женским бесплодием неясного генеза и группе контроля не обнаружено. Распределение частот генотипов по исследуемому полиморфному варианту для группы с трубным фактором бесплодия составило: 37,5% ТТ, 32,1% ТС, 30,4% СС, что достоверно отличалось от группы контроля. Генотип СС увеличивал риск бесплодия, связанного с трубным фактором (OR = 2.64, CI 1.23–5.68)
Полиморфизм rs12976445 MIR125A не ассоциирован с СПКЯ, мужским фактором бесплодия, ановуляцией, женским бесплодием неясного генеза, но ассоциирован с трубным фактором бесплодия при p=0,02. Распределение частот генотипов в группе с эндометриозом составило: 29,1% ТТ, 69,6% ТС, 1,3% СС, наблюдаются отклонения от распределения в группе контроля. Предположительно, генотип ТС влияет на развитие эндометриоза (OR=2.37, CI 1.30- 4.31)
Более 90% известных однонуклеотидных полиморфизмов (SNP), ассоциированных с заболеваниями, в геноме человека локализованы в межгенных областях, 5’ и 3’нетранслируемой области, промоторных участках и в интронах. В межгенных пространствах кодируются небелковые РНК, в частности микроРНК, образующие регуляторную сеть, задействованную в сигнальных путях и клеточных процессах. MiR-125a влияет на уровни экспрессии мРНК генов сигнального пути Wnt, участвующего в процессах регенерации, пролиферации и дифференцировки стволовых клеток, регуляции эмбриогенеза и развития злокачественных опухолей. МiR-125a широко экспрессируется во взрослых тканях, предположительно, она может модулировать чувствительность клеток к митогенным сигналам.
Полиморфизм rs12976445 располагается в промоторной области гена MIR125A, внутри гена днРНК SPACA6-AS, наиболее экспрессируемого в в жировой ткани, яичнике и семеннике. MiRNA-125a подавляют экспрессию SPACA6P-AS в нормальных клетках. SPACA6P-AS является рисковым фактором, связанным с выживаемостью при раке молочной железы, также участвует участвует в регуляторных сетях, влияющих на онкологические процессы.