Татищева К.С.a, Захарова Ф.М.b, Сломинская Н.А.a, Кузьминых Н.А a.,
Прядкина О.С. a, Бабенчук И.А.a, Татищева Ю.А. a,с, Лавринович О.Е.c
a Клиника репродукции Скайферт (ООО «Скайферт»)
b Отдел молекулярной биологии, генетики и фундаментальной медицины ФГБНУ «ИЭМ»
C НМИЦ Онкологии им. Н.Н. Петрова
Исследование морфометрических параметров ооцит-кумулюсных комплексов
как прогностических факторов дозревания ооцитов in vitro
ВВЕДЕНИЕ.
Успехи вспомогательных репродуктивных технологий позволяют сегодня не только преодолеть многие виды бесплодия, но и сохранить гаметы или эмбрионы перед гонадотоксичным лечением. В ряде случаев, при необходимости срочной реализации программ сохранения фертильности у женщин, выполняется забор незрелых ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК) с последующим дозреванием in vitro (IVM). Данный метод получил широкое распространение при различных нозологиях, однако его эффективность остается относительно невысокой и требует оптимизации протоколов и изучения факторов, влияющих на дозревание.
ЦЕЛЬ.
Целью исследования является разработка критериев успешности перехода незрелых ооцитов у пациенток разных возрастных групп к стадии MII на основе оценки клеток кумулюса и диаметра ооцитов в программах IVM и OTO-IVM, оценка влияния времени дозревания ооцита на формирование бластоцисты в программах экстракорпорального оплодотворения.
РЕЗУЛЬТАТЫ.
Общая эффективность дозревания ооцитов до стадии MII в группе OPU-IVM составила 50.6 %, в группе OTO-IVM – 37.0 %. Была выявлена статистически значимая закономерность: ооциты, успешно дозревшие до стадии MII (и в дальнейшем замороженные или давшие эмбрионы), имели достоверно больший средний диаметр — 114,5 мкм (диапазон 113 – 121 мкм). В то же время ооциты, остановившиеся в развитии, были значительно мельче: их средний диаметр составил 111,8 мкм (диапазон 107 —116 мкм) (p<0,05) . Всего в исследование было включено 891 ОКК у 58 пациентов. Анализ дозревания проводился на 102 ОКК и показал, что клетки с плотным слоем кумулюса успешно дозревали в 77% случаев. В группе с рыхлым кумулюсом частота дозревания составила 62%, а среди комплексов с единичными кумулюсными клетками частота дозревания была 37% (p <0,01). В результате исследования 319 ОКК было показано, что более половины достигли стадии МII в интервале 24-30 часов от начала культивирования. При этом, из ооцитов, полученных методом OPU-IVM, в этот период зрелости достигли 41% от всех дозревших ооцитов, а из OTO-IVM – 62 %. Ооциты, дозревавшие на вторые сутки (более 36 часов), демонстрировали сниженный эмбриологический потенциал (отсутствие оплодотворения или остановка в развитии эмбриона) (p <0,01). В группе пациенток до 35 лет частота дозревания ооцитов составила 66%, что статистически значимо выше, чем в группе старше 35 лет (p<0,01), где частота дозревания составила только 20%. У пациенток 39 и 40 лет ооциты либо не были получены, либо полностью останавливались в развитии на стадии GV/MI.
По данной работе опубликована статья: Cell and Tissue Biology, vol.20, S219-S227.,2026. DOI:10.1134/S1990519X26600262
ВЫВОДЫ.
1.Проведённое исследование показало, что эффективность дозревания ооцитов, полученных в программе OTO-IVM составила 37,0%. Хотя этот показатель уступает эффективности дозревания ооцитов
при OPU-IVM (50,6%), полученный результат остаётся клинически значимым и свидетельствует о высокой клинической ценности метода OTO-IVM для сохранения фертильности у пациенток с опухолевым поражением яичников.
2. Диаметр ооцита является достоверным прогностическим фактором его дозревания: средний диаметр успешно дозревших ооцитов составил 114,5 мкм по сравнению с 111,8 мкм у недозревших клеток.
3. Наличие плотного слоя клеток кумулюса критически важно для успешного завершения мейоза in vitro; ооциты с плотным кумулюсом имеют максимальную вероятность достижения стадии MII.
4. Ооциты, дозревавшие более 36 часов демонстрировали сниженный эмбриологический потенциал (отсутствие оплодотворения или остановка в развитии эмбриона).
5. Возраст пациенток имеет критического значение для эффективности методики OTO-IVM: установлено значительное снижение вероятности получения компетентных ооцитов у женщин старше 35 лет, достигающее нулевых показателей среди пациенток возрастной группы 39–40 лет.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
В исследование были включены две группы пациенток: группа OPU-IVM, у которых ооциты были получены путем трансвагинальной пункции фолликулов и группа OTO-IVM, где ооциты получали из ткани удаленного яичника. Для всех полученных ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК) проводили визуальную оценку плотности кумулюса и измерение среднего диаметра ооцита. Оценку зрелости ооцитов проводили через 24, 30, 36 и 48 часов. Для оценки возрастного фактора каждая из групп была дополнительно стратифицирована на две подгруппы: пациентки репродуктивного возраста до 34 лет (включительно) и пациентки позднего репродуктивного возраста (35 лет и старше).
Статистическую обработку результатов проводили с использованием программного обеспечения Jamovi (Version 2.3) и Microsoft Excel. Выбор статистических критериев базировался на современных публикациях, посвященных анализу эмбриологических данных.