UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

Escola de Engenharia de Lorena – EEL

Prof. Júlio César dos Santos

AMOSTRADORES

• Dispositivos que determinam a concentração de microrganismos suspensos no ar atmosférico.

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• Também são empregados para verificação da efetiva esterilização do ar destinado ao processo, ou na quantificação de eventuais contaminantes de áreas ditas estéreis (salas de cirurgia).

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- Princípio básico :

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• Retém-se um volume de ar;

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• Colocam-se os microrganismos para proliferar ;

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• Contam-se as colônias.

• Aspectos importantes:

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• Eficácia da coleta (distintas para diferentes amostradores);

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• Qual meio será usado para crescimento dos microrganismos coletados? (torna-se difícil eleger um meio no qual se possa afirmar que todas as espécies se desenvolvam em um dado intervalo de tempo).

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• Na coleta, certas espécies podem ser destruídas;

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• Microrganismos podem estar associados a partículas de poeira sendo mais difícil desagregar. Expressa-se o resultado em número de partículas (é sempre difícil afirmar que uma colônia tenha tido, obrigatoriamente, origem em uma única célula);

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• Pode-se fazer um teste para verificar a eficácia de esterilização:

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• Ar artificialmente contaminado ;
• Passa-se pelo filtro ;
• Determina-se a concentração microbiana antes e após passar pelo filtro;

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• Pode-se quantificar a eficiência de retenção (η) do filtro em teste:

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η = (N1-N2)/N1 · 100

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• Sendo N1 a concentração de microrganismos antes de passar pelo filtro e N2 a concentração de microrganismos depois de passar pelo filtro.

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• Neste tipo de teste, o microrganismo é conhecido: sabe-se o meio e as condições adequadas para crescimento, conhece-se o aspecto das colônias

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• Microrganismos usados: Serratia marcescens, Pseudomonas diminuta e esporos de B.subtilis var. niger

Figura 1:Esquema ilustrativo do amostrador de Andersen.

IMPINGER

• O impinger é um dos amostradores mais conhecidos e sobre o qual há muitas referências.

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• Existem, inclusive, inúmeras versões desse amostrador, sendo um exemplo típico o indicado na Figura à esquerda, extraída do trabalho de TYLER; SHIPE, sendo conhecido como "all-glass impinger" (AGI).

• Esse amostrador consta de um recipiente de vidro que contém 10 mL do líquido coletor, que pode ser água destilada, ou determinadas soluções como a solução gelatina-fosfato, constituída de gelatina (2 g/L) e Na₂HPO₄ (4 g/L), à qual se adiciona 0,01 mL de óleo de oliva esterilizado, a fim de evitar a formação de espuma.

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• Antes do início da amostragem, todo o conjunto deve ser esterilizado.

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• Uma das vantagens desse amostrador consiste no fato de não ser necessário o uso de medidor de vazão de ar, uma vez executada a calibração do aparelho, pois o tubo capilar funciona como um "orifício crítico".

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SHIPE

• Esse outro tipo de amostrador consiste em um Erlenmeyer de 125 mL, sendo a entrada do ar feita através de um "orifício crítico".
• O amostrador Shipe não conta com o tubo de entrada, e ainda lança as partículas contra a superfície do líquido coletor que está em movimento.
• Isso evita a retenção de micro-organimos e também reduz a possibilidade de destruição de células vegetativas

• Ele opera de forma similar ao AGI, colocando-se no Erlenmeyer 25 mL do líquido coletor e ligando-se a saída de ar a uma bomba de vácuo.

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• Devido à entrada do ar em alta velocidade ser efetuada na superfície do líquido, isto provoca um movimento circular do líquido coletor, sendo importante a localização do orifício de entrada, a fim de evitar uma excessiva umidificação das paredes do frasco.

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AMOSTRAGEM POR FILTRAÇÃO

• Existem vários amostradores cujo principio básico é a filtração:

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• Consiste em passar o ar em elementos filtrantes para remoção das partículas;
• Coloca-se o meio filtrante em um líquido e agita-se vigorosamente;

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• Determina- se a concentração de microrganismos no líquido pelas técnicas usuais de diluição e fazendo a contagem de células

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• Tem-se o volume de líquido e o número total de microrganismos retidos (tendo-se a vazão de ar amostrado e o tempo de amostragem, calcula-se a concentração de micro-organismos no ar)

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AMOSTRADOR DE ALGODÃO

• É esterilizado por calor seco (a fim de evitar o umedecimento das fibras e a conseqüente perda de eficiência de retenção de microrganismos).
• Deve-se medir a vazão de ar .
• Conecta-se a extremidade 2 (Fig. à esquerda) a uma bomba de vácuo, intercalando-se um sistema para a medida da vazão de ar.

• Ao final, retira-se assepticamente o algodão e transfere-se para um recipiente com água estéril de volume conhecido. Agita-se o líquido e contam-se as células (colônias em placas).

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Amostrador desmontado: a) tela de algodão;b) corpo do amostrador; c) tela plástica; d) tampa inferior.

• Pode-se usar lã de vidro, mas é necessário material bem compactado (perda de carga de 0,5 kgf/cm²).

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-Desvantagem:

• Há destruição das células;
• Há dificuldades em ressuspender os micro-organismos retidos.

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• Há um amostrador comercial da Millipore:

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• Suporte de aço inoxidável;
• Membranas com poros de 0,22 μm a 0,8 μm;
• Faz-se a retenção e depois coloca-se a membrana sobre a placa de Petri para contagem das colônias.

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AMOSTRADOR DE PAPEL DE FILTRO

• - Entre a grade e a folha de papel coloca-se uma camada de algodão hidrófilo.
• Após a esterilização do sistema, ao se efetuar a passagem de ar através da folha de papel-filtro, acoplando-se um segundo cone após o elemento filtrante e este ligado a um orifício crítico e a uma bomba de vácuo, os microrganismos devem ficar retidos sobre esta folha. 

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• Terminada a amostragem, o sistema pode ser desmontado, adicionando-se a seguir um meio de cultura ao algodão hidrófilo, de forma a permitir, após um certo período de incubação, a contagem de colônias surgidas na superfície do papel-filtro.

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AMOSTRADORES DE FENDA

• Nos amostradores de fenda, a eficiência da retenção depende da vazão do ar, assim como da distância da fenda ao meio de cultura.
• O ar amostrado deve ser incidido sobre um meio de cultura. Com a mudança brusca na direção do fluxo, as partículas são retidas na superfície do meio.

• Durante o período de amostragem, o disco gira com velocidade angular regulável de acordo com a contaminação da amostra de ar (0,1-0,2 rpm)

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• Após isso, incuba-se a placa de Petri e contam-se as colônias. Quando a contagem é feita sobre a superfície coletora, há problemas com agregados celulares

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• Um trabalho da literatura relatou 95% de retenção para 28 L/min de ar e 2 mm de distância da fenda ao meio.

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• Vantagens: pode-se fazer avaliação contínua de sistemas de esterilização, inclusive ao longo do tempo
• Desvantagens: em amostragens prolongadas, perde-se umidade do meio.

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