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INSTITUT NATIONALE DE FORMATION SUPERIEURE PARAMEDICALE d’ALGER

MINISTERE DE LA SANTE DE LA POPULATION ET DE LA REFORME HOSPITALIERE

MÉMOIRE PROFFESIONNEL DE FIN D’ETUDE

Option : Laborantin de santé publique

Le dosage d’IgE spécifiques aux protéines du lait de vache chez les enfants Agés de moins de deux ans : Technique de détection et allergène le plus fréquent.

Elaboré par :

  • Benkhelifa yousra
  • Bouderba mayssa

Dirigé par :

Dr. Benyahia Amel

Promotion 2015-2018

14-05-2018

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INTRODUCTION

PROBLEMATIQUES

HYPOTHESES

PARTIE THEORIQUE

PARTIE PRATIQUE

CONCLUSION

Diagnostic

Généralités

Le Plan

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INTRODUCTION

PROBLEMATIQUES

HYPOTHESES

PARTIE THEORIQUE

PARTIE PRATIQUE

CONCLUSION

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Résultats et discussion

Le Plan

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HYPOTHESES

PROBLEMATIQUE

INTRODUCTION

Le Lait est l’aliment de base des Nourrissons Indispensable à la croissance.

L’APLV 4eme Allergie alimentaire chez l’enfant , Connue depuis plusieurs siècles, l’incidence est en augmentation Problème de santé publique.

L’amélioration des connaissances à conduit les industriels à établir des formules lactées bovines par leur origine provoque :

Allergie aux protéines de lait de vache

L’intolérance au lactose

Les protéines du lait sont séparés en :

Caséine

Lactosérum

Le Dosage d’IgE spécifiques est une étape importante du diagnostic et le suivi de la maladie allergique

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HYPOTHESES

INTRODUCTION

PROBLEMATIQUE

2. Quel est l’allergène le plus fréquent

  1. Quel est l’apport du dosage d’IgE spécifiques dans le diagnostic et le suivi d’une APLV chez les enfants âgées < 2ans au niveau de l’unité d’immunologie du laboratoire centrale de CHU N’FISSA HAMOUD

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INTRODUCTION

PROBLEMATIQUE

HYPOTHESES

1. Le dosage d’IgE spécifiques a un intérêt dans le diagnostic et le suivi d’une APLV.

2. L’allergène le plus fréquent semble être la caséine.

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PARTIE THEORIQUE

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Diagnostic

Généralités

Définition :

  • Réaction du système immunitaire vis-à-vis d’une ou plusieurs PLV
  • Apparaissent chez les jeunes enfants ++++
  • Complication : Manifestation légère, Modéré peuvent affecter :

La peau

L’apparail respiratoire

Le système digestif

Hypersensibilité retardée (Type 4)

Hypersensibilité Immédiate (Type 1)

Médiée par les IgE

à médiation cellulaire

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Algérie:

3,6%

France:

2-7%

Turquie:

0,8% AA

Amérique:

3,5% AA

Angleterre:

5-6%

Diagnostic

Généralités

Epidémiologie :

12,6% d’AA de l’enfant

Incidence : 0,3-7,5%

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Diagnostic

Généralités

Physiopathologie :

1/ Les acteurs de la réaction allergique :

L’allergène

Les protéines lactées bovines

80% caséine

20% lactosérum

β-lactoglobuline

α-lactalbumine

Réactions croisées :

Plusieurs Allergènes se ressemble aux niveaux de la composition\Structure

IgE dirigé contre un tel allergène

Reconnaitre les épitopes d’allergène semblable

déclencher des symptômes

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Diagnostic

Généralités

Physiopathologie :

1/ Les acteurs de la réaction allergique :

L’immunoglobuline E

  • AC thermolabile/ homocytotrope
  • Le support immunologique de l’hypersensibilité immédiate
  • Facteur sérique responsable de transfert passif :

Réaction allergique sujet sensibilisé

Demi-vie :

Circulante : 2,5 jours

Fixées : (plusieurs sem/mois)

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Diagnostic

Généralités

Physiopathologie :

1/ Les acteurs de la réaction allergique :

Les cellules effectrices

Porteuses de FCɛRI

Porteuses de FCɛRII

  • Mastocyte
  • Basophile
  • Macrophage
  • Eosinophile

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Diagnostic

Généralités

Physiopathologie :

1/ Les acteurs de la réaction allergique :

Les médiateurs

Préformés (L’histamine)

Néoformés (Lipidiques)

Les mastocytes et les basophiles Sont les principales sources

  • Leucotriènes
  • Prostaglandines

IL-4,IL-10,IL-12,IL-5

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Diagnostic

Généralités

2/ Rappel sur le tissu lymphoïdes associés au tube digestif (GALT) :

Les cellules lymphocytaires :

Les plaques de payer

Lymphocytes intra-épithéliums

Lymphocyte de lamina propria

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Diagnostic

Généralités

2/ Mécanisme de l’APLV :

Phase de sensibilisation

Phase de déclenchement

1er contact

2eme contact

Allergène

Barrière intestinal

Cellules présentatrice

LTh2

Cytokines

LB

Plasmocyte

Synthèse d’IgE

Allergène

Libération des médiateurs inflammatoire

Mastocyte

Manifestations cliniques

Sensibilisation

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Diagnostic

Généralités

Manifestation clinique :

Manifestation immédiate

Manifestation retardées

Emission de gaz

Gonflement de la lèvre

Eczéma

Vomissement

Toux

Dermatite atopique

Eruption cutanée

Diarrhée chronique

Eternument

Toux

Urticaire

Choc anaphylactique

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Diagnostic

Généralités

Manifestation clinique :

Manifestation immédiate

Manifestation retardées

Emission de gaz

Gonflement de la lèvre

Eczéma

Vomissement

Toux

Dermatite atopique

Eruption cutanée

Diarrhée chronique

Eternument

Toux

Urticaire

Choc anaphylactique

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Diagnostic

Généralités

Manifestation clinique :

Manifestation immédiate

Manifestation retardées

Emission de gaz

Gonflement de la lèvre

Eczéma

Vomissement

Toux

Dermatite atopique

Eruption cutanée

Diarrhée chronique

Eternument

Toux

Urticaire

Choc anaphylactique

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Diagnostic

Généralités

Manifestation clinique :

Manifestation immédiate

Manifestation retardées

Emission de gaz

Gonflement de la lèvre

Eczéma

Vomissement

Toux

Dermatite atopique

Eruption cutanée

Diarrhée chronique

Eternument

Toux

Urticaire

Choc anaphylactique

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Diagnostic

Généralités

Facteurs de risque :

L’environnement

fœtal

Le fœtus peut être exposé aux allergène alimentaire

Le trop d’hygiène

Modification des vaccins + traitement ATB

L’hyperpermiabilité

Intestinale

Maturité imparfaite du SI intestinale chez l’enfant

Exposition à l’allergène

Protéines de lait de vache

Facteurs génétique

  • Prédisposition génétique
  • pas héréditaire

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Diagnostic

Généralités

Evolution de l’APLV :

Présence d’une APLV dans la petite enfance

Développement ultérieur d’autre manifestations allergiques

L’APLV est de bon pronostic

Autre allergie alimentaire

18%

Rhinite allergique

31%

Un asthme

41%

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Généralités

Diagnostic

Tests in vivo :

Test cutanée

Test de provocation

  • Vont chercher à démontrer la présence d’AC d’un Allergène dans la peau

Prick-test

Patch-test

  • Immédiate
  • MEC les mastocytes de la peau Avec un ou plusieurs Allergènes.
  • Sont des épicutaneo-réaction
  • Retardée
  • Ou (réintroduction)

  • provoquer et reproduire les symptômes d’allergie. Il existe deux types :

Orale

Labiale

L’anamnèse

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Généralités

Diagnostic

Tests in vitro :

Tests non spécifiques

Tests spécifiques

IgE total

FNS : Hyperéosinophilie

Autre

IgE spécifique

  • Définie par un chiffre absolu supérieure à 400 els/mm³
  • N’est qu’ un élément d’orientation

  • Rôle dans l’hypersensibilité I
  • Permet la recherche terrain atopique
  • Elisa simple Sandwich.
  • Détermination quantitative de la concentration des IgE produit dans le sérum humain .
  • s’adresse aux réactions à médiation IgE
  • Test de dégranulation des basophiles
  • Dosage des médiateurs
  • Test de stimulation cellulaire CAST
  • Les immunoempreintes

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Traitement :

Généralités

Diagnostic

Traitement :

régime diététique adapté et strict l'éviction complète du Lait de vache

Un lait de formule à hydrolyse extensive

Les laits à base

d’autres

protéines de lait animales

Les laits

hypoallergéniques

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PARTIE Pratique

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Résultats et discussion

Matériels et méthodes

Présentation de l’étude

  • Une étude rétrospective allant du Janvier 2016 à Février 2018
  • Unité d’immunologie du laboratoire central de biologie du CHU N’FISSA HAMOUD
  • Une étude prospective allant du 18 février au 26 avril 2018

Objectifs :

Evaluer la survenue de l’APLV chez les enfants Agés < 2ans.

Déterminer le taux d’IgE spécifiques aux protéines de lait de vache et préciser l’allergène le plus fréquent.

Lieux et date de l’étude :

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Présentation de la population étudiées :

Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

  • Les enfants qui n’ont pas de fiche de renseignements
  • Les enfants ayant des fiches de renseignements qui manque des informations utiles pour notre études.
  • Un tableau clinique évocateur d’APLV.
  • Une fiche de renseignement dument remplie .

Inclusion

Non inclusion

  • 158 enfants (<2ans) :

Hospitalisés

En service de

pédiatries.

Non hospitalisés (externes)

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  • Le sérum du sang des enfants recueilli par ponction veineuse sur tube sans anticoagulant.

Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Matériel :

Biologique

Non Biologique

1/Consommable :

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  • Le sérum du sang des enfants recueilli par ponction veineuse sur tube sans anticoagulant.

Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Matériel :

Biologique

Non Biologique

2/L’équipements :

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  • Le sérum du sang des enfants recueilli par ponction veineuse sur tube sans anticoagulant.

Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Matériel :

Biologique

Non Biologique

2/Réactif du kit :

  • Tout ces réactif sont conservé à une T˚=2-8˚C.
  • Il faut éviter:
  • Une contamination microbienne .
  • Une lumière directe sur la solution de coloration .

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Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Principe et mode opératoire :

Pré incubation :

Diluer le sérum dans le CCD

1

45 min

Préparation de la solution de lavage

Méthode :

Elisa sur immunoblot

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Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Principe et mode opératoire :

Pré incubation :

Diluer le sérum dans le CCD

1

45 min

Préparation de la solution de lavage

1er incubation

2

45 min

300 ul de sérum dans les cuvettes

Lavage + tapottment

Méthode :

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Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Principe et mode opératoire :

Pré incubation :

Diluer le sérum dans le CCD

1

45 min

Préparation de la solution de lavage

1er incubation

2

45 min

300 ul de sérum dans les cuvettes

1er Lavage

3

  • Remplir les cuvettes de réaction 3 / 4 fois + agitation douce.
  • Egoutter les cuvettes par simple retournement du Papier absorbant.

Méthode :

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Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Principe et mode opératoire :

2ème Incubation

4

45 min

300 ul de solution de détection

Lavage + tapottement

Méthode :

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Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Principe et mode opératoire :

2ème Incubation

4

3ème Incubation

5

20 min

300 ul solution de conjugué

Lavage + tapottement

45 min

300 ul de solution de détection

Lavage

4ème Incubation

Méthode :

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Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Principe et mode opératoire :

2ème Incubation

4

3ème Incubation

5

20 min

300 ul de substrat

Lavage à l’au de robinet + tapottement

20 min

300 ul solution de conjugué

Lavage

45 min

300 ul de solution de détection

Lavage

4ème Incubation

54

6

4ème Incubation

Méthode :

Séchage

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Evaluation et interprétation :

Résultats et discussion

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Traitment informatique

À l’aide du logiciel MEDIWISS installé dans l’équipement informatique relié au scanner (Improvio C)

En UI/ml

Les résultats sont exprimées

En classes

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1/ Description de la population ciblée :

Présentation de l’étude

Matériels et méthodes

Résultats et discussion

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2/ Selon le test d’IgE spécifique :

Selon le test d’IgE spécifiques

La majorité des patients considéré comme atteint d’APLV sont sensibilisé vis-à-vis d’une/ plusieurs PLV identifiées.

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2/ Selon la positivité :

Selon le type d’allergène

Nos resultats ne concordent pas avec les autres etudes (Michel, 2011)

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2/ Selon les allergènes :

Selon les classes d’âge

Selon le sexe

Prédominance de L’alpha-lactalbumine (32,20%)

Chez le sexe fi

[0-6] : béta-lactoglobuline (56,52%)

]6-12] : L’alpha-lactalbumine (27,12%)

]12-18] : Caséine (21,95%)

]18-24] : L’alpha-lactalbumine

Prédominance de la beta-lactoglobuline (86,96%)

Chez le sexe masculin

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2/ Selon les allergènes :

Selon les signes cliniques

l’alpha-lactalbumine est l’allergéne le plus responsable de l’apparition de toutes les signes cliniques dont les signes digestives sont les plus fréquent.

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Selon les ATCD familiaux

Selon les ATCD personnels

Nos résultats concordent avec l’etudes (Matarazro, et al., 1998)(Navarro, et al., 1987)

Les plus prédominants sont les ATCD alimentaires

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Selon d’autres allergènes

Nos résultats concordent avec (Holgate-Church, 1995)

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Selon les années

La fréquence de l’APLV est de plus en plus en augmentation

(Rancé F, et al., 2000)

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CONCLUSION

  • Notre étude confirme la fréquence de l'APLV chez les enfants âgés de moins de deux ans, Particulièrement chez ceux qui ont des antécédents familiaux d'atopie. Elle est la première à apparaitre dès les premiers mois de la vie, où le lait constitue l'aliment de base de tous les nouveau-nés.
  • L'APLV s'exprime cliniquement par des manifestations très variable implique donc un diagnostic particulier basé sur les tests cutanés et le test d’IgE spécifiques, qui est indispensable dans le suivi de cette allergie .
  • L'allergène le plus fréquent et le plus évocateur de l'APLV chez la population infantiles de base âge est l'α-lactalbumine.
  • En effet, L'enfant atteint d'APLV peut être allergique à deux, voire à plusieurs allergènes.
  • Enfin, l'allaitement maternel reste nécessaire afin de différer l'introduction des laits artificiels mis en cause de cette affection.

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Merci pour votre attention

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Le dosage d’IgE spécifiques aux protéines du lait de vache chez les enfants Agés de moins de deux ans : Technique de détection et allergène le plus fréquent.

Elaboré par :

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Dirigé par :

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