2014-04-21 應用微生物實驗      本次實驗課網頁與QR code 本講義之 link

講義編輯：江易原。  本講義版權沒有，歡迎使用

主題

檢驗食物中的生菌數大腸桿菌群--衛福部的方法與 3M Petrifilm 快檢片

目的

1. 透過檢驗實際的食物樣本之生菌數及大腸桿菌群，學習食品微生物之技術與品管之觀念。同時比較衛福部公佈的方法與快檢法 (例如 3M  Petriflm) 之效果。

2. 學會查詢標準辦法，例如衛福部公告的檢驗辦法或是 AOAC的辦法。

3. 學習快速檢測的觀念，並比較與傳統法 (衛福部公佈之辦法) 在時間、操作簡便、成本之差異與特色。

文件建立與管制

 ISO22000 或 HACCP 常用的四階文件之格式，本實驗可以將衛福部 (或是 AOAC) 的檢驗方法、儀器操作手冊、食品衛生標準等列為第三階文件，將實驗紀錄列為第四階文件 (例如應用在食品品管結果之紀錄，可以參考 HACCP 課本 p100，成品品質檢驗紀錄表)

行政院衛生署公告：訂定「食品微生物之檢驗方法－生菌數之檢驗」，自即日生效 (pour plates，傾注法)

行政院衛生署公告：訂定「食品微生物之檢驗方法－大腸桿菌群之檢驗」，自即日生效 (三管法)

有關食品含菌數的相關法規

一般食品衛生標準

生食用食品類衛生標準（96.12.21訂定）

生熟食混合即食食品類衛生標準

鄭重提醒

因為器材與技術的限制，本次實驗無法完全按照標準方法進行採樣與檢驗，因此所測出來的數據無法當作有效的檢驗結果。

圖一 本次實驗流程圖

實驗步驟

(0) 樣品稀釋

a. 根據衛生署的方法，取 50 g 的樣本，加入 450 mL 稀釋液 (可以使用秤重法，例如取 48 g 樣品，加入稀釋液到 480 g )，此為十倍稀釋。

b. 置入鐵胃，小心將袋口固，進行拍打。

c. 取拍打後的稀釋液 10 mL 加到 90 mL 的稀釋液並混勻 (請複習使用唧筒及玻璃 pipette 之操作方法，可以參考之前的影片 連續稀釋乳酸菌飲料 ) 或是 QR code

(1) 衛福部--生菌數

a. 取稀釋液 1 mL 加在空白、無菌培養皿 (先於背面標示好稀釋度與樣品)。請標示 -2, -3, -4，各兩個 (因為要二重複)

b. 倒入適量的融化態的培養基，經過適當的混勻後在 35℃ 培養 48 小時後記錄實驗結果 。操作方法請參考傾注平板法計算菌數或 QR code

(2) 3M Petrifilm--生菌數

a. 取稀釋液 1 mL 加在 AC 3M Petrifilm (先於正面標示好稀釋度與樣品)。請標示 -2, -3, -4，各兩個 (因為要二重複)。 請小心緩慢放開薄膜才能漸少氣泡。

b. 在 35℃ 培養 48 小時後記錄實驗結果 。操作方法請參考使用 3M Petrifilm AC 測定生菌數

或 QR code

(3) 衛福部--大腸桿菌群

a. 每個濃度取稀釋液 1 mL 加在 LST 培養基 (管內有一隻倒置的小試管，用來捕捉微生物產器) 進行三重複。 試管請先貼上膠帶，請標示 -2, -3, -4，各三個 (因為要三重複)

b. 在 35℃ 培養 48 小時後記錄實驗結果 。

(4) 3M Petrifilm--大腸桿菌群

a. 取稀釋液 1 mL 加在 EC 3M Petrifilm (先於正面標示好稀釋度與樣品)。請標示 -2, -3, -4，各兩個 (因為要二重複)。 直接放開，不需要小心緩慢放開

b. 在 35℃ 培養 48 小時後記錄實驗結果 。操作方法請參考使用 3M Petrifilm EC 測定 E. coli K12或 QR code

實驗紀錄表一

實驗紀錄表二