Статья “Влияние Ориона на иммунную систему”

ВЛИЯНИЕ ОРИОНА НА ИММУННУЮ СИСТЕМУ

Старение иммунной системы представляет собой наиболее яркий пример старения организма в целом. Возрастные изменения различных звеньев иммунной системы начинаются очень рано, еще в период полового созревания, и достигают значительных изменений на поздних этапах жизни человека.

Следует отметить, что нарушение  в функционировании лимфоцитов приводит к существенному снижению качества жизни. Так, нарушение активности клеток приводит к снижению специфичности иммунного ответа, что способствует увеличению с возрастом частоты вирусных, грибковых и бактериальных заболеваний внутренних органов и кожи. В то же время нарушение  дифференцировки лимфоидных клеток и изменение соотношения Т-клеточных субпопуляций в крови и периферических лимфоидных органах приводит к аутоиммунным нарушениям и способствует возникновению ряда хронических воспалительных процессов в различных органах и системах организма, проявляющихся в виде хронических болей и приводящих, в конечном итоге, к инвалидности.

Известно, что воздействие антигенов различной этиологии (вирусных, бактериальных, видоизмененных собственных, и т.п.) на протяжении жизни, а также атрофия тимуса, ведут к прогрессивному снижению количества вновь образованных наивных Т лимфоцитов (1, 2). Следовательно, репертуар периферических Т-клеток у людей пожилого возраста (старше 70 лет) представляет собой преимущественно «старые», нечувствительные к апоптозу и  не реагирующие на антиген наивные Т-клетки, а также олигоклональные клетки памяти (3). Тем не менее, несмотря на атрофию тимуса в достаточно молодом возрасте, количество циркулирующих Т-лимфоцитов поддерживается на постоянном уровне и не снижается с возрастом  (4), в основном благодаря антиген-неспецифической гомеостатической пролиферации Т-клеток в периферических органах на протяжении всей жизни  (5, 6). В то же время, гомеостатическая экспансия ведет к нарушению соотношения клеточных субпопуляций (СD4+, CD8+, CD56+) (4, 5, 12), а также резкому укорочению длины теломер и ограничению пролиферативной способности Т-лимфоцитов (3, 7, 8), что является одной из основных причин повышенной смертности пожилых людей от сезонных вирусных инфекций (9, 10, 11).

Таким образом, основными нарушениями иммунной системы, возникающими при старении, являются нарушение соотношения основных Т-клеточных субпопуляций на периферии (в крови и вторичных лимфоидных органах), а также их сниженная пролиферативная активность.

 Предполагается, что исследуемый препарат может оказывать благоприятное влияние на оба типа возрастных нарушений в иммунной системе. Поскольку препарат является цитостатиком, основным возможным механизмом его действия может быть индукция апоптоза и выведение из организма «старых», нечувствительных к апоптозу и  не реагирующих на антиген наивных Т-клеток, а также снижение гомеостатической пролиферации CD8+-лимфоцитов, которая, возможно, приведет к устранению дисбаланса Т-клеточных субпопуляций.

Целью работы было выявление иммуномодулирующего действия препарата на субпопуляционный состав лимфоцитов крови и их пролиферативную активность invitro в ответ на фитогемагглютинин.

Методы исследования.

1.      Определение субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови иммунофлуоресцентным методом с использованием антител к поверхностным маркерам лимфоцитов CD3, CD8, CD4, CD19, CD16 с использованием проточного цитофлуориметра.

2.      Исследование интенсивности пролиферативного ответа Т-лимфоцитов периферической крови в ответ на фитогемагглютинин in vitro в МТТ-тесте.

Результаты исследования.

Действие препарата «Орион» на состояние иммунной системы было исследовано на 5 добровольцах в возрасте от 57 до 82 лет (3 мужчин, 2 женщины). Пациенты обследовались дважды: до введения препарата и спустя 1 – 3 месяца после. Результаты отдельных пациентов представлены в таблицах 1 – 5. Суммарные результаты представлены в таблице 6.

Как видно из полученных результатов,  после введения препарата у всех пациентов растет пролиферативная активность Т-лимфоцитов крови (Табл. 6), что свидетельствует о положительном действии «Ориона» на этот важный показатель. Увеличение пролиферативной активности Т-клеток может быть обусловлено удалением посредством апоптоза  «старых», нечувствительных к апоптозу и  не реагирующих на антиген наивных Т-клеток, а также клеток памяти, однако для проверки данного предположения необходимо проведение дополнительных исследований.

Б.Э, 60 лет.

Таблица 1. Иммунологические показатели пациента Б.Э. до и через 3 месяца после приема препарата «Орион».

 

Показатели

Результаты

 

Возрастные изменения,

%

Референтные значения

До

Через     3 мес

Т-лимфоциты  (CD3+ CD19-), %

65.9

85.4

50-75

В-лимфоциты (CD3- CD19+), %

12.4

4.8

5-15

NK-клетки (CD3- CD16+), %

14.7

5.35

5-15

NKТ-клетки (CD3+ CD16+), %

7.6

7.52

+1.05

3-7

Т-хелперы/ Т-индукторы (CD3+ CD 4+), %

35.6

55.3

+55.3

30-45

Т-цитотоксические  (CD3+ CD8+), %

31.4

23.8

+24.2

20-35

Т-лимфоциты незрелые (CD4+ CD8+), %

0.32

1.10

0-1

Регуляторный индекс (CD4+/CD8+), у.е.

1.13

2.46

+117,7

1.2-2.5

Пролиферативная активность, ИС

1.19

1.60

+34.5

1.5-3.0

Примечания:

1.      + – положительное действие препарата на изучаемые показатели.

2.      –  – отрицательное действие препарата на изучаемые показатели.

К.Ю., 62 года

Таблица 2. Иммунологические показатели пациента до и через 1 месяц после первого введения препарата «Орион».

 

Показатели

Результаты

Возрастные изменения,

%

Референтные значения

До введения

1 мес после введения

Т-лимфоциты  (CD3+ CD 19-), %

58.3

67.73

50-75

В-лимфоциты (CD3- CD 19+), %

11.30

5.90

5-15

NK-клетки (CD3- CD 16+), %

26.00

14.6

+43.8

5-15

NKТ-клетки (CD3+ CD 16+), %

6.21

5.02

+19.2

3-7

Т-хелперы/ Т-индукторы (CD3+ CD 4+), %

31.25

31.90

+2.1

30-45

Т- цитотоксические  (CD3+ CD 8+), %

24.25

37.72

-55.5

20-35

Т-лимфоциты незрелые (CD4+ CD 8+), %

0.25

0.76

0-1

Регуляторный индекс (CD4+/CD 8+), у.е.

1.28

0.85

-33.6

1.2-2.5

Пролиферативная активность, ИС

1.07

1.14

+6.5

1.5-3.0

Примечания:

1.      + – положительное действие препарата на изучаемые показатели.

2.      –  – отрицательное действие препарата на изучаемые показатели.

Таблица 3. Иммунологические показатели пациента СВВ (М, 81 год) до и через 1 месяц после первого введения препарата «Орион».

 

Показатели

Результаты

Возрастные изменения,

%

Референтные значения

До введения

1 мес после введения

Т-лимфоциты  (CD3+ CD 19-), %

62.50

59.90

50-75

В-лимфоциты (CD3- CD 19+), %

1.58

3.84

5-15

NK-клетки (CD3- CD 16+), %

26.90

26.95

5-15

NKТ-клетки (CD3+ CD 16+), %

6.90

6.29

+8.8

3-7

Т-хелперы/ Т-индукторы (CD3+ CD 4+), %

44.30

42.10

-5.0

30-45

Т-цитотоксические  (CD3+ CD 8+), %

23.70

19.70

+19.9

20-35

Т-лимфоциты незрелые (CD4+ CD 8+), %

2.67

2.25

0-1

Регуляторный индекс (CD4+/CD 8+), у.е.

1.87

2.14

+12.3

1.2-2.5

Пролиферативная активность, ИС

1.38

1.43

+3.6

1.5-3.0

Примечания:

1.      + – положительное действие препарата на изучаемые показатели.

2.      –  – отрицательное действие препарата на изучаемые показатели.

Таблица 4. Иммунологические показатели пациента МВГ (М, 57 лет) до и через 1 месяц после первого введения препарата «Орион».

 

Показатели

Результаты, %

Возрастные изменения,

%

Референтные значения

До введения

1 мес после введения

Т-лимфоциты  (CD3+ CD 19-), %

70.6

70.9

50-75

В-лимфоциты (CD3- CD 19+), %

9.51

13.53

5-15

NK-клетки (CD3- CD 16+), %

11.03

12.09

5-15

NKТ-клетки (CD3+ CD 16+), %

2.40

3.58

-49.2

3-7

Т-хелперы/ Т-индукторы (CD3+ CD 4+), %

31.90

49.9

+56.4

30-45

Т-цитотоксические  (CD3+ CD 8+), %

30.20

23.70

+21.5

20-35

Т-лимфоциты незрелые (CD4+ CD 8+), %

1.20

0.76

0-1

Регуляторный индекс (CD4+/CD 8+), у.е.

1.05

2.11

+101.0

1.2-2.5

Пролиферативная активность, ИС

0.96

1.29

+34.4

1.5-3.0

Примечания:

1.      + – положительное действие препарата на изучаемые показатели.

2.      –  – отрицательное действие препарата на изучаемые показатели.

Таблица 5. Иммунологические показатели пациента КВИ (М, 82 года) до и через 1 месяц после первого введения препарата «Орион».

 

Показатели

Результаты

Возрастные изменения,

%

Референтные значения

До введения

1 мес после введения

Т-лимфоциты  (CD3+ CD 19-), %

40.37

46.90

50-75

В-лимфоциты (CD3- CD 19+), %

7.02

10.10

5-15

NK-клетки (CD3- CD 16+), %

46.05

35.30

+23.3

5-15

NKТ-клетки (CD3+ CD 16+), %

3.66

4.83

-32.0

3-7

Т-хелперы/ Т-индукторы (CD3+ CD 4+), %

28.90

37.40

+22.1

30-45

Т-цитотоксические  (CD3+ CD 8+), %

14.80

17.60

-18.9

20-35

Т-лимфоциты незрелые (CD4+ CD 8+), %

0.90

2.37

0-1

Регуляторный индекс (CD4+/CD 8+), у.е.

1.95

2.12

+8.7

1.2-2.5

Пролиферативная активность, ИС

1.22

1.39

+13.9

1.5-3.0

Примечания:

1.      + – положительное действие препарата на изучаемые показатели.

2.      –  – отрицательное действие препарата на изучаемые показатели.

Таблица 6. Иммунологические показатели пациентов до и через 1 – 3 месяца после первого введения препарата «Орион», M+m (n=5).

 

Показатели

Результаты

P

До введения

1 мес после введения

Т-лимфоциты  (CD3+ CD 19-), %

59.53 + 5.20

66.17 + 6.35

P=0.16

В-лимфоциты (CD3- CD 19+), %

8.36 + 1.92

7.63 + 1.82

P=0.78

NK-клетки (CD3- CD 16+), %

24.94 + 6.12

18.86 + 5.40

P=0.09

NKТ-клетки (CD3+ CD 16+), %

 5.35 + 0.99

 5.45 + 0.67

P=0.85

Т-хелперы/ Т-индукторы (CD3+CD4+), %

34.39 + 2.70

43.32 + 4.21

P=0.11

Т-цитотоксические  (CD3+ CD8+), %

24.87 + 2.95

24.50 + 3.51

P=0.93

Т-лимфоциты незрелые (CD4+ CD8+), %

 1.07 + 0.44

 1.45 + 0.36

P=0.36

Регуляторный индекс (CD4+/CD8+), у.е.

 1.46 + 0.19

 1.94 + 0.28

P=0.21

Пролиферативная активность, ИС

 1.16 + 0.07

 1.37 + 0.08

P=0.04*

Что касается баланса Т-клеточных субпопуляций в крови обследованных пациентов, то показано, что у 4 пациентов из 5 увеличивается количество CD3+CD4+-клеток в крови (Табл. 1, 2, 4, 5, 6; р=0,04*), у 3 пациентов из 5 снижается количество CD3+CD8+-клеток в крови (Табл. 1, 3, 4, 6; р=0,93), а у 4 пациентов из 5 увеличивается регуляторный индекс (CD4+/CD8+) (Табл. 1, 3, 4, 5, 6; р=0,21).  Полученные результаты могут свидетельствовать о том, что у людей, прошедших курс лечения препаратом «Орион», происходит нормализация баланса субпопуляций Т-лимфоцитов, которая в дальнейшем может обеспечить восстановление полноценного иммунного ответа у людей пожилого возраста.

 

Выводы.

1.          Через 1 месяц после приема препарата «Орион» происходит усиление пролиферативной активности Т-лимфоцитов периферической крови в ответ на митоген фитогемагглютинин in vitro, что свидетельствует об улучшении иммунологических функций пациентов.

2.          Введение препарата приводит к тенденции нормализации субпопуляционного состава Т-лимфоцитов крови, что может в дальнейшем обеспечить восстановление полноценного иммунного ответа у людей пожилого возраста.

3.          В целом, работа нуждается в доработке: увеличении выборки пациентов, и увеличении срока обследования после первичного введения препарата. Неизвестным остается механизмы действия препарата, для установления которых необходимо проведение дополнительных экспериментальных  и клинических исследований.